液相色谱硬件基础知识.ppt

第二部分 硬件基础知识 HPLC简易流程图 储液瓶 由机械性能和化学稳定性好的不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯材料制成 使用过程中储液瓶应适当密闭 所有溶剂应先过滤，再装入储液瓶 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于DMF，THF， CHCl3 等溶剂 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 常用脱气方法 超声脱气 减压脱气 在线脱气 脱气机-在线真空脱气 脱气机主要由脱气管、真空室和真空泵组成。 真空室内的脱气管由特殊的透析材料制成，当溶剂流经脱气管时，溶解在溶剂中的气体穿过管壁被脱出。 LC-20AT LC-20AD 柱塞往复泵结构示意图 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 进样器 手动进样器 自动进样器 要求： 无残留 扩散小 进样体积可变 可承受高压 部分注入：一般要求进样量最多为定量环体积的一半，如20μl的定量环最多进样10μl的样品，并且要求每次进样体积准确、相同 全量注入：进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μl的定量环最少进样60至100μl的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。 交叉污染产生的原因 手动进样方法 一般的方法 1.在进样状态下清洗针口 2.在装填状态下插入微量注射器 3.注入样品 4.切到进样状态 便捷的方法（不需清洗） 1.进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态 3.注入样品 4.切回到进样状态 自动进样器 自动进样器 清洗（Rinse）：进样针移动到清洗口，针的外壁被清洗液清洗的过程 排气（Purge）：排除管路中的气泡和更换旧流动相的过程 常用色谱柱 反相 C18 (ODS) 、C8 、C4 、苯基、TMS、 氰基 正相 硅胶、氰基 、氨基、二醇基 离子交换色谱 阳离子交换剂 强阳离子交换剂(SCX) R-SO3- 弱阳离子交换剂(WCX) R-COO- 阴离子交换剂 强阴离子交换剂(SAX) NR4+ 弱阴离子交换剂(WAX) DEAE 体积排阻色谱 苯乙烯－二乙烯基苯共聚物、葡聚糖，琼脂糖，聚丙烯酰胺 分离模式的选择 色谱柱的选择 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 液相色谱检测器的选择 样品的性质 分离目的不同，对检测的要求不同 定量：高选择性、高灵敏度 定性或制备：通用性 常用检测器 紫外可见光检测器 (UV) 二极管阵列检测器 (PDA) 荧光检测器 (RF) 示差折光检测器 (RID) 电导检测器 (CDD) 蒸发光散射检测器 (ELSD) 质谱检测器 (LCMS) 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：朗伯-比耳定律，A＝eCL 优点： 1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定 检查流通池与管路有无漏液 检测时，请关闭前面板 清洗流通池，防止堵塞 标准流通池：12 μL，耐压12 MPa （半微量流通池：2.5 μL） 氘灯：2000小时，不要频繁的开关（3小时） 采集三维谱图，可以发现单波长检测时未检测到的峰 光谱定性，谱库有哪些信誉好的足球投注网站 峰纯度检验 启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定 检查流通池与管路有无漏液 检测时，请关闭前面板 清洗流通池，防止堵塞 标准流通池：10 μL，耐压12 MPa （半微量流通池：2.5 μL） 氘灯：2000小时，不要频繁的开关（3小时） 启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定 检查流通池与管路有无漏液 检测时，请关闭前面板 清洗流通池，防