凝胶色谱校正曲线制作.pptVIP

凝胶色谱概论——GPC曲线研制 作者：李炳源 一.分析一批 样品 配制每瓶为单一组份窄标样，或各组份分子量差10陪以上混合窄标样 建立样品表，分子量最大的为1号瓶，依次减小 一.分析一批 样品—标样配制 一.分析一批一般样品 二.填入分子量 在通道中按瓶号依次选中各标样 右击—改变样品—量（工具钮） 进入组份编辑器—当前（工具标） 填入各峰分子量 保存修改 1.选所有标样—改变样品 2. “修改样品”—“量” 3.进入组份编辑器—当前 4.填入各峰分子量—第一瓶 4.填入各峰分子量—第二瓶 4.填入各峰分子量—第三瓶 5.保存刚才的修改 三.建立数据处理方法 选分子量最大窄标再现图谱 向导—GPC—峰宽参数—阈值—积分区域—最小峰面积、峰宽（可不选） GPC特殊参数：相关或普适校正，多阶校正。 GPC特殊参数： Vo（色谱柱：300mm×7.8 mm）为5.5- 6.0 ml。 Vt为2 Vo 保存方法 1.再现分子量最大图谱 2.用向导建立处理方法 2.用向导建立处理方法—GPC 2.用向导建立处理方法—积分参数 2.用向导建立处理方法—积分参数 3. GPC特殊参数—校正与多阶拟合 4. GPC特殊参数— Vo与Vt 5.保存方法 四.产生校正曲线 在通道中按瓶号次序选中全部标样、再现图谱 打开处理方法 积分、校正计算、观察校正曲线 存储校正曲线 随时修正积分错误 1.再现图谱 2.打开处理方法 3.积分、校正计算、观察校正曲线 3.1第一瓶计算后的纠正曲线 3.2第二瓶计算后的校正正曲线 3.3第三瓶计算后的校正曲线 4.存储校正曲线 5.纠正无效曲线 纠正积分定性错误：在组份编辑器填入分子量时， 按峰位填入，如定性错误将导致分子量错误。 增加采样点，将拟合阶数由5阶降为低阶 检查处理方法参数是否正确，如（V0 5.5X3） 5.1纠正无效曲线—查看积分 5.1纠正无效曲线—查看积分 5.1纠正无效曲线—查看方法参数 5.1纠正无效曲线— 降低拟合阶数 5.1纠正无效曲线— 降低拟合阶数 五.宽峰计算 再现宽样谱图, 打开处理方法 编辑现有处理方法，产生宽峰积分参数 积分、计算 观看结果、分布曲线，保存处理方法。 保存宽样分布曲线—需要重新打开谱图、方法、计算后—选项—另存为。 1.宽峰计算—再现谱图打开处理方法 2.宽峰计算—编辑现有处理方法 2.宽峰计算—产生宽峰积分参数 3.宽峰计算—积分、计算 4.1宽峰计算—结果 4.2宽峰计算—分子量分布图 5.1保存宽样分布曲线—正确 5.2保存宽样分布曲线—错误 六.用寛样产生校正曲线 宽样分析后其结果（分布曲线或各分子量）可用于标化系统 重新标化系统，把宽样改为宽标—用分布曲线，获得拟合更好的新的校正曲线 标化新系统——用原分布曲线，获得新的校正曲线 标化新系统——用统计值（各分子量），获得新的校正曲线。 1.1 重新标化系统—改宽样为宽标 1. 2重新标化系统—选入分布曲线 1.3 重新标化系统— 打开谱图、处理方法、计算 注意 只算了第一瓶 只算了第一、二瓶 算了第一、二、三瓶 有了足够采样点后， 纠正曲线为有效曲线 定性错误 定性正确 点击处 理方法 只算了第一瓶 曲线有效 第一瓶计算 积分、计算、结果 结果、选项、储存分布曲线 保存方法后要重新打开图谱方法再计算否则无法保存 * * * * * * * 警告：高分子化合物分子量越大，溶解度越小，样品配制时不可搅拌或超声，以防降解，只能放置自然溶解。 水溶性样，Mp≤2k，可配置浓度2mg/ml 溶解要2h; ≤800k，最大可配置浓度1mg/ml ；800k 0.3mg/ml 放1-3d。标样密闭冷藏，冷藏不超过1月。 进样量：三根水性凝胶柱串联，大分子量柱在前，小分子在后。可进样100ul.（柱3可进量200ul，2，进量50ul）建议定量环200ul，2414 放大倍数=16. 油溶性样：聚苯乙烯 ≤20k，四氢呋喃为溶剂， 配置0.5mg/ml (0.05% WV) ,进样20ul，2414 放大倍数=8. 建立样品表，标明瓶号，分子量最大放在前面，依次排列 2mg/ml 输入1号瓶每个峰 分子量Mp 点击当前 输入2号瓶每个峰 分子量Mp 点击下一个 输入3号瓶每个峰分子量 点击确定 分子量最大 叠加 处理方法向导 相关与普适 多阶 Vo（三柱串联：300 ×7.8 mm） 为5.5- 6.0 ml三倍 Vt为2 Vo