水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化-中国农业科学.PDFVIP

中国农业科学 2006,39(8):1511-1517 Scientia Agricultura Sinica 水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化 1,2 1 1 陆云华 ，马立新 ，严 红 1 2 （湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室，武汉 430062 ； 宜春学院生物工程系，宜春 336000 ） 摘要：【目的】尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达。【方法】根据已发表的相关 序列，分别设计引物，通过 PCR 技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件：质体核 糖体(16S)RNA 操纵元启动子（Prrn ）、质体 psbA 基因 3′端终止子（psbA3′）、氨基糖苷 3′-腺苷酰基转移酶基因 （ aadA ）、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG，大小3362 bp)，命名为crDNA、甘露聚糖酶基因（man ）、 绿 荧 光 蛋 白 基 因 （ gfp ）。 构 建 了 水 稻 质 体 多 顺 反 子 定 点 整 合 表 达 载 体 pLM21(-psbC-Prrn-RBS -man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′- trnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪，用添加了壮观霉素的选择分化 培养基筛选。【结果】获得质体转基因烟草4株。用PCR、激光扫描和Western blot等方法检测都证实 man、gfp、 aadA 三个基因且均得到表达，用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。【结论】水稻质体多顺反子定点整合 表达载体已整合到烟草质体基因组中，并得到表达。 关键词：水稻；多顺反子；水稻载体构建；基因枪转化；烟草质体转化 Construction of Rice Chloroplast Multicistron Site Integration Expression Vector and Its Transgene to Tobacco Chloroplast 1,2 1 1 LU Yun-hua , MA Li-xin , YAN Hong 1 ( Laboratory of Molecular Microbiology and Gene Engineering, College of Life Science, Hubei University, Wuhan 430062; 2Biotechnology Department of Yichun University, Yichun 33600 ) Abstract: 【Objective 】The rice (Oryza sativa) chloroplast multicistron site integration expression vector will be transformed for expression into the tobacco chloroplast. 【Method 】According to the published correlative DNA sequence, a series of elements for construction of