.用于无针注射疫苗的纳米载药系统的初步研究_.pdfVIP

2 载 BSA 纳米粒的制备与表征 2.1 引言 PLGA 是一种生物可降解的高分子聚合物，具有良好的生物相容性，广泛应用于 各种微球和纳米粒的制备，目前已有多种上市的微球制剂采用其作为载体材料。 目前，纳米粒的制备方法主要有：乳化蒸发法、溶剂扩散法、盐析法和纳米沉积 法等。其中，纳米沉积法因其操作简单、可重复性强而广泛应用于纳米粒的制备。 本章将采用纳米沉积法，以 PLGA 为载体材料，制备粒径在 100－200 nm 的载 BSA 的纳米粒，采用考马斯亮蓝 G250 法测定其包封率和载药量，通过单因素实验 考察纳米粒制备过程中的影响因素；并利用激光粒度仪和透射电子显微镜对所制备 的纳米粒进行表征。 2.2 实验部分 2.2.1 实验仪器及试剂 2.2.1.1 主要仪器 BS110S 型分析天平 北京 Satrorius 仪器系统有限公司 KQ-100 型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 PHS-3C 型数字式酸度计 上海雷磁仪器厂 85-2 型恒温磁力搅拌器 常州国华电器有限公司 TDL-5-A 型台式离心机 上海安亭科学仪器厂 UV-2102PC 紫外可见分光光度计 尤尼柯仪器有限公司 MAN5004 型激光粒度分析仪 英国 Malvern 仪器公司 U410 Premium 型超低温冰箱 美国 New Brunswick Scientific 公司 Tecnai G2 20 型透射电子显微镜 荷兰 FEI 公司 2.2.1.2 主要试剂 14 PLGA （50:50，Mw ＝20 000 ） 药用级 山东岱罡生物材料有限责任公司 磷酸二氢钠 分析纯 天津市广成化学试剂有限公司 磷酸氢二钠 分析纯 天津市广成化学试剂有限公司 牛血清白蛋白 上海凌飞科技有限公司，Sigma 分装 丙酮 分析纯 上海试一化学试剂有限公司 考马斯亮蓝 G250 分析纯 Sigma 分装，上海晶纯试剂有限公司 无水乙醇 分析纯 上海试一化学试剂有限公司 异丙醇 分析纯 上海试一化学试剂有限公司 2.2.2 实验方法 2.2.2.1 纳米粒的制备 根据文献资料总结，本章采用纳米沉积法制备纳米粒，其制备工艺为： （1）精密称取一定量的PLGA ，加入丙酮使之完全溶解，得到一定浓度的溶液， 即为有机相。 （2 ）配置一定的分散相。分散相选择见下文。 （3 ）量取一定体积的分散相，置于恒温磁力搅拌器上搅拌，向其中缓慢滴加一 定体积的有机相。 （4 ）继续搅拌约4 h ，待有机溶剂完全挥发即形成纳米粒，得纳米粒悬浮液。若 出现沉淀，经0.8 μm 微孔滤膜过滤后供下一步使用，或经真空冷冻干燥后得纳米粒 的冻干粉。 2.2.2.2 载 BSA 纳米粒的制备 本文选用 BSA 作为模型蛋白，根据文献资料总结和预实验，蛋白质主要是通过 在缓冲液中孵育过夜而吸附于纳米粒上。具体方法如下： 称取一定量的 BSA ，磁力搅拌下，向其中加入一定体积的纳米粒悬浮液，搅拌 约 24 h 后，于 4 ℃下 15 000 rpm 离心 20 min ，用 0.9% NaCl 溶液洗涤三次，所得的 沉淀再以等体积的 0.9% NaCl 溶液或超纯水再悬浮，备用。 2.2.2.3 纳米粒制备过程中的影响因素