高效液及相色谱-2.ppt

高效液相色谱 (2)（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）——仪器与分离模式 许 旭分析室色谱组  Tel: 3426 Email: xuxu@mail.sioc.ac.cn 3.4．检测系统 HPLC检测器分类、性能指标 几种常用的检测器 通用型检测器： 示差折光 介电常数 电导 蒸发光散射检测器 专用型检测器： 紫外 荧光 电化学 放射性检测器 性能指标： 噪声(Noise, No)和漂移(Draft)： 高频噪音（毛刺）、短周期噪音（通常与泵、流动相有关）上漂、下漂 灵敏度：S=响应值/样品量或浓度 检测限：两倍噪声时的样品量 检测器线性范围：应尽可能大 检测器死体积：要求小于组分峰体积的1/10。目前都小于8微升 检测器响应时间：要求?/3，目前使用的仪器一般都在0.5-1秒 B 几种常用的检测器 a 紫外吸收检测器与二极管阵列检测器（最常用） b 示差折光检测器 c 荧光检测器 d 电化学与电导检测器 e 其它检测器 —— 蒸发光散射检测器 a 紫外吸收检测器与二极管阵列检测器 使用最多 工作原理：朗伯-比尔定律 A = lg(I0/I) = -lgT = ?bc 组成：检测池、光学系统和电路系统。 b 示差折光检测器 通用性检测器。 原理：溶液的折光指数 n = n1C1+n2C2 其中n1和n2分别为溶质和溶剂的折光指数，C1和C2分别代表溶质和溶剂的摩尔百分浓度。 因为 C1+C2 = 1 所以 ?n= n - n2 = (n1 - n2) C1 因此，若n1? n2，则溶液与溶剂折光指数的差值?n与溶质浓度成线性关系。而n1与n2的相对大小则决定了峰的正反。 常用的示差折光检测器有两种： 偏转式 反射式 其它类型还有： 干涉式 克里斯琴效应式 c 荧光检测器 化合物产生的荧光强度，在浓度很低时，与入射光强度、荧光效率和化合物浓度成正比。 即： F = 2.3?I0?bc 荧光检测器的检测限比紫外吸收检测器低一个数量级以上，选择性也好 d 电化学与电导检测器 ——电化学检测器 安培检测器 极谱检测器 库仑检测器 ——电导检测器 主要用于离子色谱 在溶质浓度很低，离子的当量电导接近其极限当量电导时，溶液的电导与溶质的浓度成正比。 e 其它检测器 蒸发光散射检测器 图 柱后反应检测器 介电常数检测器 放射性同位素检测器 离子选择性电极检测器 旋光检测器 圆二色谱检测器 等等 3.5 记录与色谱工作站 A 记录仪、色谱数据处理机与色谱工作站 早期的HPLC只配有记录仪记录谱图，然后人工计算峰面积或峰高，十分麻烦。后来专用的积分仪（色谱数据处理机），可以自动打印峰高、峰面积和保留时间，还可以做一些简单的定量计算，但不能存储数据。 色谱工作站则是包括色谱控制、数据采集处理和存储的计算机系统。 B 色谱工作站的一般功能 色谱参数的选择和设定；自动化操作仪器；色谱数据的采集、“实时”处理和存储；对采集和储存的数据进行后处理；给出一套完整的色谱分析数据并打印出来 值得注意的是，色谱数据处理参数的选择和设定非常重要，只有在正确选择参数的前提下才能得到正确的结果。一般情况下，工作站得到的结果与人工计算的结果没有明显差别。 3.6 制备型液相色谱 分析型柱容量在几十到几百微克。 用于提取标准物质、纯化天然产物和合成产物时，需要大的柱容量。近年来发展的制备型HPLC，一次进样可以制备克级以上的样品。工业级制备HPLC制备量更大，可以提供各种色谱纯的样品。 A 色谱柱、输液泵 色谱柱如下所述 ， 分析柱： 内径2 - 4.6mm 长度10-25cm 粒径3-10um 柱容量ug级 半制备柱： 5 – 10 10-25cm 5-10um 5-50mg级 制备柱： 10 (通常20mm) 25cm 20-30um mg-g级， 采用粗颗粒填料，制备柱柱效明显低于分析柱，但样品处理量大、成本低，并可降低对大流量泵的要