酶化学及.ppt

别 构 酶 酶的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后，酶构象发生改变，导致酶活性发生改变，这类酶称为别构酶，这种作用称为别构效应。 调节物/效应物 正调节物，负调节物 正别构、负别构 同促效应、异促效应 1.米氏酶 2.正协同效应别构酶 3.负协同效应别构酶 正协同效应使酶的反应速度对底物浓度的变化极为敏感； 负协同效应使酶的反应速度对底物浓度的变化不敏感； 区分标准： 酶与底物结合达到90%饱和度时的底物浓度 Rs=------------------------------------------------------------- 酶与底物结合达到10%饱和度时的底物浓度 Rs=81：米氏酶 Rs81：正协同效应别构酶 Rs81：负协同效应别构酶 目前常使用Hill系数区分米氏酶与别构酶 Hill方程 : 将Hill方程中的有关参数换成别构酶中的有关参数 n为Hill系数，米氏酶Hill系数 n=1 正协同效应的别构酶 n1 负协同效应的别构酶 n1 正协同效应别构酶 大肠杆菌的天冬氨酸转甲酰酶 ATCase： C6R6 : 2 C3 +3 R2 ATP：正调节物 CTP：负调节物 ATCase活性调节的机理 有催化活性的构象 无催化活性的构象 负协同效应别构酶 甘油醛-3-磷酸脱氢酶：4亚基 别构酶调节酶活性的机理 1、对称或协同模型（symmetry or concerted model,也称齐变模型、MWC模型） 1965年由Monod、Wyman和Changeux提出。 该模型的要点 : 2、序变模型（sequential model，也称KNF模型） 1966年由Koshland、Nemethy和Filmer提出。 该模型的要点 : 共价调节酶 常见的有: 磷酸化/脱磷酸化 腺苷酰化/脱腺苷酰化 乙酰化/脱乙酰化 尿苷酰化/脱尿苷酰化 甲基化/脱甲基化 S-S/SH相互转变 同 工 酶 乳酸脱氢酶（LDH） 固定化酶（immobilized enzyme） 固定化酶是将水溶性的酶连接到固相载体上， 使它以固相的状态作用于底物，因此也称固相酶。 固定化酶的优点 固定化酶的理化性质 固定化酶的制备 ① 吸附法 ② 偶联法 ③ 交联法 ④ 包埋法 习题： 1.称取25mg蛋白酶制剂配成25ml溶液，取2ml溶液测得含蛋白氮0.2mg， 另取0.1ml溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500ug酪氨酸，假定1个酶活力单位定义为每分钟产生1ug酪氨酸的酶量，请计算： (1)酶溶液的蛋白浓度及比活 (2)每克酶制剂的总蛋白含量及总活力。 2.甘油醛-3-磷酸脱氢酶，分子量4万，由4个相同亚基组成，每个亚基上有一个活性位点，在最适条件下，5μg纯酶制品每分钟可以催化2.8μmol甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力。 3.在不同底物浓度的反应体系中，分别测有无抑制剂存在时的v，数据如下： ［S］ 无I 有I(2.2×10-4mol/L) mol/L (×10-4) v(μmol/min) v(μmol/min) 1.0 28 17 1.5 36 23 2.0 43 29 5.0 65 50 7.5 74 61 求有无抑制剂存在时的Vmax和Km（Km’），并判断这种抑制剂是什么类型的抑制剂。 4. 在一组10ml的反应体系中，加入不同浓度的底物。分别测反应初速度，得数据如下： ［S］mol/L v(μmol/min) 5．0×10-7 0.0096 5．0×10-6 0.071 5．0×10-5 0.20 5．0×10-4 0.25 5．0×10-3 0.25 5．0×10-2 0.25 不作图计算： (1)V 和Km。 (2)计算［S］=1.0×10-6 mol/L和［S］=