高效液相色谱法测定食品中阿斯巴甜的含量读后感.docVIP

高效液相色谱法测定食品中阿斯巴甜的含量 实验意义： 在人们日常所食用的食品中, 甜味剂是常用食品添加剂之一。阿斯巴甜(A s partame)又名甜味素、 天冬甜母、 天冬甜精, 化学名称为天门冬酰苯丙氨酸甲酯(分子式为C14H18N 2O5, 相对分子质量为294 . 31)。于 1965 年由美国Searle 公司在合成四肽的研究时偶然发现, 其甜味特征几乎与蔗糖相同, 甜度是蔗糖的200 倍, 甜味纯正。阿斯巴甜在干燥状态下较稳定, 在溶液中的稳定性受pH、 温度和放置时间的影响较大。溶液pH 3—6 时, 其稳定性良好, pH 3 时易水解成天冬氨酰苯丙氨酸, 当pH 6 时易环化成52苯甲基23, 6 双氧222哌嗪乙酸。目前已有80 个国家批准使用, 我国规定除罐头食品外可用于各类食品, 其用量按生产需要适量使用。20 世纪 80 年代以来, 全球阿斯巴甜的年消费增长率超过20% , 远远超过其他人工合成甜味剂平均增长率 5%的速度。目前国际上对阿斯巴甜的安全性存在很大的争议, 2005 年 7 月, 意大利科学家公布的一份研究结果称, 动物实验证明, 阿斯巴甜可导致大鼠肿瘤。 实验方法: 食品中阿斯巴甜的测定方法主要有滴定法、 气相色谱法(GC)、 高效液相色谱法和高效毛细管电泳法等。 国内外应用较多的是高效液相色谱法。 但在应用中发现, 食品添加剂阿斯巴甜的高效液相色谱法样品处理烦琐, 分析周期长。采用纯水超声提取食品样品, 微孔滤膜过滤后直接进样测定, 简化了操作步骤, 加快了分析速度, 所以适合日常检测。 仪器与设备 A gilent1200 高效液相色谱仪, 配紫外检测器色谱柱为 InertsilODS2 C18 , 5L m, 150×4 . 6mm;Sigma 3K30 高速离心机 ;M I LL I2 Q 超纯水器 ;Votexgenie22 型旋涡混匀器。 试剂和溶液 阿斯巴甜(纯度 99% )标准贮备液: 称取阿斯巴甜 10 . 0mg, 用冰乙酸水溶液(体积比为 1% )定容至10 . 0mL , 浓度为1 . 0mg? mL。 阿斯巴甜标准贮备液用水配制成浓度分别为1 . 0、 5 . 0、 10 . 0、 25 . 0、 50 . 0Lg? mL 的标准工作液。工作液现用现配。 磷酸二氢钾(分析纯) ; 乙腈(色谱纯) ; 冰乙酸(色谱纯) ; 磷酸(分析纯)。 磷酸二氢钾水溶液(10mmol? L , 用磷酸调pH = 3 . 5) ; 卡瑞é 液: 称取 22g 乙酸锌, 加入 3mL冰乙酸, 溶解于水中并稀释至 100mL ; 卡瑞ê 液: 称取 10 . 6g 亚铁氰化钾溶解于水中并稀释至100mL。 样品处理 (1) 饮料类: 取5mL 试样超声脱气10m in 后用0 . 45L m 滤膜过滤, 滤液直接进高效液相色谱仪测定。 (2) 水果罐头类: 准确称取粉碎后的样品20 . 0g 于50mL 离心管中, 加水 20mL , 旋涡振荡后超声提取10m in。然后将该溶液转移至50mL 容量瓶中, 用10mL 水洗离心管, 转入容量瓶, 并用水定容至刻度。充分混匀后静置片刻, 将部分溶液转入15mL 离心管, 以10000 r? m in高速离心5m in。将上清液用0 . 45L m 滤膜过滤, 滤液进高效液相色谱仪测定。 (3) 糖果类: 准确称取粉碎后的样品 10 . 0g 于 50mL 离心管中, 加水 30mL , 旋涡振荡溶解(必要时可加热) , 超声提取10m in。 然后将该溶液转移至50mL 容量瓶, 用10mL 水洗离心管, 转入容量瓶, 并用水定容至刻度线。充分混匀后用0 . 45L m 滤膜过滤, 滤液进高效液相色谱仪测定。 (4) 含蛋白的乳类食品等复杂样品: 称取10 . 0g 样品于50mL 离心管中, 加水 30mL , 旋涡振荡后超声提取10m in。然后将该溶液转移至50mL 容量瓶, 加入卡瑞é 液、 卡瑞ê 液各1 . 0mL 后剧烈振荡 3m in, 用水定容至刻度线。充分混匀后静置片刻, 将部分溶液转入 15 mL 离心管, 以 10000r? m in高速离心5m in。将上清液用0 . 45L m 滤膜过滤, 滤液进高效液相色谱仪测定。 色谱条件 色谱柱: 迪马 InertsilODS2 C18 (5L m, 150×4 . 6mm ) ; 流动相: 磷酸二氢钾水溶液; 检测器波长:210nm; 流速: 1 . 0mL? m in; 进样量: 20L L; 柱温: 30℃。 线性范围及检出限 通过响应峰面积值定量, 以信噪比(S? N ) 3 时的可检出最低标准浓度为检出限。本方法的最低检出限: 饮料类样品