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遗传学实验指导讲义 东北林业大学野生动物资源学院 ©版权信息2003-2005 除部分数据来源于商业公司外，实验内容设计版权归讲义编写人员所有。 编写人员名单 郑冬（2003-2005）、刘学东（2003-2005）、董海艳（2005） 讲义编辑、修改和使用历史记录 2003/06 参照Bio-Rad公司Education kit产品以及清华大学遗传学课程大试验，并结合专业实 际制定本讲义。 2003/09-2004/07 用于动保专业2001和生物技术2001、2002遗传学实验。 2004/09-2004/12 用于动保专业2002遗传学实验。总结过去一年半的实验过程，发现学生在胶回收操作 中常常出现问题。由于无法充分回收PCR产物，后期实验的成功率降低。而学生对此分 析不深入。 2005/09-2005/12 用于动保 2003 和动医 2003 遗传学实验；其中 PCR-RFLP 为改进部分，其依据为本实 验讲义编写人员发表的文章 “Restriction endonucleases digesting DNA in PCR buffer ” （Journal of Forestry Research, 16(1): 58-60 ）。 目 录 Exp 1. 引物的实验设计、参数特征及热循环体系的确定 Exp 2. φX174/HaeIII DNA 分子量的制备 Exp 3. λDNA 特定片段的PCR 扩增及电泳 Exp 4. PCR 产物胶回收 Exp 5. 利用限制性内切酶在PCR 反应液中直接酶切PCR 产物 附 录 引物的实验设计、参数特征及热循环体系的确定 目的 以λDNA 为模板，尝试利用软件设计和分析引物（该部分也可作为演示性实验） 要求 掌握DNA的热动力学基本知识和引物设计的基本原则；掌握GenBank数据的查找和使用。 实验基础数据 φX174 RFI DNA （GenBank Access No. J02482 ） λDNA （GenBank Access No. J02459 ） 酶切数据来源于rebase 软件 The Primer Generator 在线引物设计程序。 Primer 3 比较有名的在线引物设计程序。 E-PCR 查找 DNA 序列的 STSs （sequence tagged sites 序列标签位点）的在线工具软件。 PCR primer selection 选择引物用来扩增序列的一段精确区域的在线程序。 Web Primer 斯坦福大学提供的在线引物设计软件。 Anthy4.39离线引物设计软件 历年实验已经设计完成的部分引物序列 5-ATTCTGACTGTAGCTGCTGA-3 5-AATTCATGGACAGTTCGCAC-3 5-GGA ATT CAT GGA CG