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第三节连锁分析与人类基因的诊断和定位 1988年人类基因图工作组 （HGM） • 常染色体上已确定480个位点， • 在X染色体上已确定了139个位点 • 人类基因定位研究近来发展很快，在研究技术 上主要应用体细胞杂交和DNA分析法。 • 但是，对于那些无法以体外培养杂种细胞表达 的性状或疾病，就需要借助于家系连锁分析法。 • 这种方法适合于分析基因连锁、基因定位、基 因诊断等。 一、限制性片段长度多态 （restriction fragment length polymorphism, RFLP) ——酶切后产生的DNA片段长度的差异，称为限制 性片段长度多态性。 原理：限制性内切酶能识别并切 割特异核苷酸序列。 某位点核苷酸序列发生突变有可 能导致缺失或产生新的限制性 酶切位点。 若突变只发生在同源染色 体的一条上，另一条正常，限 制性内切酶酶切DNA片段带型 可用于鉴别同源染色体的差异。 第一代标记限制性片段长度多态 （RFLP ）。从RFLP的信息 与疾病表型间的关系进行连锁分析，找到致病基因。如 Huntington症。 镰刀性贫血病的诊断： 该病由－球蛋白基因一个核苷酸突变 （由GAG变成GTG) 导致的，这个核苷酸改变也正好导致一个限制性酶切位点改 变。杂合体经酶切产生带型差异，识别该位点。 5 二、基因连锁与基因诊断 基因诊断可分为直接和间接基因诊断两类： 一类是直接检查致病基因本身的异常。它适用已知基因异常 的疾病； 另一类是基因间接诊断。当致病基因虽然已知但其异常尚属 未知时，或致病基因本身尚属未知时，也可以通过对受检 者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致 病基因的染色体。连锁分析是基于紧密连锁的基因或遗传 标记通常一起传给子代，因而考察相邻DNA是否传递给了 子代，可以间接地判断致病基因是否传递给子代。 D disease dominant ; WT wild-type RFLP (A1/A2) locus (A2/A2). The D is linked to an RFLP defined by A1 and A2 Linkage of a human disease gene to an RFLP linkage between A1 and D. 例如：苯丙氨酸酮尿症的基因诊断 （RFLP) 由于苯丙氨酸羟化酶 （PH ）异常 PH基因 2014/10/10 三. 家系连锁分析与基因定位 • 家系的连锁分析首先要从群体中选择适合的家系，要求被 挑选家系中双亲之一或两个为双杂合体，并且注意双杂合 体家系要随机抽样，避免产生偏倚。 • 例如，已知ABO血型的基因在9q34 ，甲髌综合症与ABO