测定大肠杆菌在不同培养条件下的生长曲线.pptVIP

实验三 大肠杆菌生长曲线的测定 实验目的 1. 了解细菌生长曲线的基本特征，测定大肠杆菌在不同培养条件下的生长曲线。 2. 掌握利用细菌悬液的混浊度间接测定细菌生长的方法。 实验原理 生长曲线就是把一定量的单细胞微生物接种到恒定容积的液体培养基中，在合适的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延长而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值（或OD值）为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为微生物的生长曲线，它反映了微生物群体的生长规律。依据其生长速率的不同，可把生长曲线分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 实验原理 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。 本实验采用分光光度计(spectrophotometer)进行光电比浊测定，由于细菌悬浮液的浓度与混浊液成正比，因此，可利用分光光度计测定菌悬浮的光密度来推知菌液的浓度，并将所测得的光密度值（OD值）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的实生长曲线。 实验器材 1. 菌种 培养18~20h的大肠杆菌(Escherichia coli)培养液。 2. 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨液体培养基 （2）葡萄糖铵盐合成培养基 3. 仪器或其他用具 721型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管，无菌吸管等。 葡萄糖 2.0g K2HPO4 7.0g KH2PO4 2.0g 柠檬酸钠·2H2O 0.5g MgSO4 · 7H2O 0.1g （NH4）2 SO4 2.0g 水 1 000ml pH 7.2 实验方法 1. 菌种的培养 取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑 取1环，接入牛肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18~24h 左右。此菌液用作“种子”培养液。 2. 分装培养基 将牛肉膏蛋白胨液体培养基和葡萄糖铵盐 液体培养基分装11支试管，每管内5ml。用记号笔标明 培养时间，即0、1.5,、3、 4、 6、8、10、 12、14、16 和20 h。 3. 接种 用1 ml无菌吸管，每次准确地吸取0.2ml大肠杆菌培养液分别接种到已编号的11支牛肉膏蛋白胨液体培养基和11支葡萄糖铵盐液体培养基试管中，接种后振荡，使菌体混匀。 4. 培养 将已接种的试管置摇床37℃振荡培养，振荡频率250 r /min（温度和频率可随需要调节）。分别在0、1.5,、3、 4、 6、 8、10、 12、14、16和20 h将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。 5. 比浊侧定 分别以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基和葡萄糖铵盐液体培养基作空白对照，选用600 nm波长进行光电比浊测定。从最稀浓度的菌悬液开始依次测定，对细胞密度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基和葡萄糖铵盐液体培养基适当稀释后测定，使其光密度值在0.1～ 0.65之内(测定OD值前，将待测定的培养液振荡，使细胞均匀分布)，记录OD值时，注意乘上所稀释的倍数。 实验结果 2. 绘制大肠杆菌的生长曲线： 以上述表格中的时间为横坐标，大肠杆菌的OD值为纵坐标，在坐标纸上作图。所绘制成的曲线即为大肠杆菌在本实验条件下的生长曲线。 注意事项 在生长曲线测定中，一定要用空白对照管的培养液随时校正仪器的零点。 思考题 1.如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同?两者各有什么优缺点? 2.细菌生长繁殖所经历的四个时期中，哪个时期其代时最短? 若细胞密度为103/ml，培养4.5 h后，其密度高达2 ×108/ ml，请计算出其代时。 3.次生代谢产物的大量积累在哪个时期? 根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累更多? 谢 谢 * * 实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题 葡萄糖铵盐合成培养基： 将测定的OD600值填入下表： 光密度值OD 天然培养基 合成然培养基 1 2 1 2 培养时间（h）