LS55荧光分光光度仪说明书.pdfVIP

ＬＳ－４５／５５ 荧光／磷光／发光 分光光度计 使用说明书 美国Perkin Elmer 公司 ２００3 年４月 一、理论基础 荧光、磷光、化学发光及生物发光均属于分子发光。现将其原理简介如下： 室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基态的分子吸收能量后被激发为激 发态。激发态不稳定，将很快衰变到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象被 称为“发光”。 每个分子具有一系列严格分立的能级，称为电子能级，而每个电子能级中又包含了一系 列的振动能层和转动能层。图中基态用Ｓ０表示，第一电子激发单重态和第二电子激发单重 态分别用Ｓ Ｓ表示，０、１、２、３…表示基态和激发态的振动能层（见图１），第一、 １、 ２ 二电子的激发三重态分别用Ｔ 和Ｔ 表示（见图２）。 １ ２ 图 １荧光的能级图 １、荧光的产生 当分子处于单重激发态的最低振动能级时，去活化过程的一种形式是以１０－９～１ －６ ０ 秒左右的短时间内发射一个光子返回基态，这一过程称为荧光发射（见图１）。 ２、磷光的产生 从单重态回到三重态的分子系间跨越越迁发生后，接着发生快速的振动驰豫而到达 三重态的最低振动能层上，当没有其他过程同它竞争时，在１０－４ ２ ～１０秒左右的时 间内跃迁回基态而发生磷光（见图２）。 由此可见，荧光与磷光的的根本区别是：荧光是由激发单重态最低振动能层至基态 各振动能层的跃迁产生的，而磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间 跃迁产生的。 图 ２磷光的能级图 ３、化学发光及生物发光的产生 某些物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发 至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出了一定波长的光，这种吸收化学能使 分子发光的过程称为化学发光。化学发光也发生于生命体系，这种发光被称为生物发光。 二、仪器简介 １、仪器原理 图 ３ ＬＳ４５／５５荧光／磷光／发光分光光度计的原理图 用于测量荧光／磷光／发光的ＬＳ４５／５５是由图３所示的五个主要部件组成的：光 源、激发光单色器、样品池、发光单色器及检测器。 由光源发出的光经激发光单色器得到所需要的激发光波长。如其强度为Ｉ０ ，通过样品 池后，由于一部分光能被荧光物质吸收，其透射光强度减为Ｉｔ 。荧光物质被激发后，将发 射荧光。为了消除入射光和散射光的影响，荧光的测量通常在与激发光成直角的方向进行。 为了消除可能共存的其他光纤的干扰，如由激发光所产生的反射光、瑞利散射光和拉曼光， 以及为将溶液中的杂质所发生的荧光滤去，以获得所需要的荧光，在样品池和检测器之间设 置了发光单色器，荧光作用于检测器上，得到了相应的电信号，经放大后再记录下来。 （１）激发光源：在紫外－可见区范围内，氙灯最为常用，而又分连续和脉冲氙灯。Ｌ Ｓ４５／５５采用的是脉冲氙灯。二者比较如下： 脉冲氙灯与连续氙灯的比较 脉冲氙灯 连续氙灯 功耗仅8.3W(50Hz) 功耗达150W 光源能量输出相当于20KW(50Hz) 能量输出仅150W 灯压低 寿命长 灯压高,工作时达40~50 大气压 电源简单 轻便 电源复杂 笨重 臭氧产生量极少,低于NIOSH 标准 产生大量臭氧,需特殊的灯室以减少影响 产生热量很少 工作时温升达300~4