多芳基取代蝶啶类化合物的合成及其抗肿瘤活性.docVIP

多芳基取代蝶啶类化合物的合成 及其抗肿瘤活性 黄金凤 马林( 中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所，广州 510275 摘 要 合成了一系列新的多芳基取代蝶啶类化合物，结构已经元素分析、IR, 1H NMR和MS等确定。采用MTT法对这些化合物进行了体外的抗肿瘤活性测试，结果表明，它们对几种肿瘤细胞株都具有较好的抑制活性。它们可能是通过抑制二氢叶酸还原酶（DHFR）或其它叶酸依赖性酶而起抗肿瘤作用。 关键词 蝶啶 合成 抗肿瘤活性 二氢叶酸还原酶（DHFR） 蝶啶（Pteridines）是一种动物色素的总称，它们都具有一个嘧啶并吡嗪环（图1-a）的母体结构。最早是由英国科学家Hopkins于1896年从菜粉蝶的翅部获得的，因此被称为蝶啶。蝶啶化合物广泛地存在于生物体中，例如叶酸 图1 一些蝶啶化合物的结构 MTX虽然是50年来唯一广泛应用于临床的叶酸拮抗剂类抗肿瘤药，但是它的细胞毒作用缺乏选择性，毒性大，抗瘤谱窄，并且抗药性严重。为此，本文在以往研究工作的基础上，在蝶 啶的2位引入亲脂性的芳香基团, 6位引入氮芥结构, 设计并合成了几个新的蝶啶类化合物（Ⅰ~ Ⅲ），并对它们进行了抗肿瘤活性体外筛选实验。结果显示它们对几种肿瘤细胞株都具有较好的抑制活性。它们可能是通过抑制DHFR或其它叶酸依赖性酶而起抗肿瘤作用，进一步的研究还在进行之中。 这类蝶啶化合物的具体合成路线如图2所示[3]。 图2 其中嘧啶部分和苯乙腈部分的合成如图3所示[4-10]。 图3 1 实验部分 1.1 试剂与仪器 苯甲脒盐酸盐、4-甲基苯甲脒盐酸盐、4-氯苯甲脒盐酸盐、丙二腈、2-甲基吡啶、MTT（溴化-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑）等均购自美国Aldrich公司，CT-DNA购自华美生物工程公司，其余试剂及溶剂均为国产市售分析纯，未进一步处理。 熔点用北京泰克仪器公司的双目镜XT-4型显微熔点测定仪测定（温度计未经正），红外光谱Bruker公司的 EQUINOX55型红外仪测定（KBr压片），核磁共振谱用Varian Unity INOVA 500型核磁仪测定（TMS为内标，CDCl3或CD3OD或d6-DMSO为溶剂），质谱用VG ZAB-HS 质谱仪测定（FAB）,元素分析用Elementar Vario EL元素分析仪测定. 1.2 肟基丙二腈及其银盐（1）的合成[4] 在一500 mL烧瓶中加入25 g（0.38 mol）丙二腈，30 mL 水，120 mL冰醋酸，在冰盐浴冷却（约-10℃）并搅拌下分批加入50 g（0.72 mol）NaNO2，约0.5 h加完（反应温度控制在0 ~ 10 ℃之间）。加完后继续在5 ℃以下搅拌反应4 h，得到橙红色溶液。搅拌下慢慢往此溶液中加入53 g （0.312 mol）AgNO3溶于100 mL水的溶液，立即有橙黄色沉淀生成。加完后静置10 min，滤集沉淀，水洗至中性，烘干，得到橙黄色固体产物1 ，重60 g，收率为95.23 %（以AgNO3计）。未进一步纯化，直接用于下面反应。 1.3 4,6-二氨基-5-亚硝基嘧啶衍生物（3）的合成通法[5,6] 将10 mmol 各种取代苯甲脒盐酸盐（2a~c）置于50 mL圆底烧瓶中，加入30 mL甲醇，室温搅拌下慢慢加入11 mmol 研成粉末的1，加完后继续搅拌1 h，黄色的银盐渐渐消失，而产生白色的AgCl沉淀。滤去白色沉淀，用少量甲醇洗涤滤渣，合并滤液及洗液，得到一黄色溶液，此溶液在≤40 ℃下减压蒸出溶剂，得到黄色针状晶体。将此晶体置于50 mL圆底烧瓶中，加入10 mL 2-甲基吡啶，加热125 ~ 130 ℃环化，反应0.5 h，反应液由黄色变为黄绿色，最后变为蓝绿色。冷至室温后加入60 mL水，有蓝绿色沉淀析出，冷至10 ℃左右，过滤，用冰水洗涤至无吡啶味，烘干，得到蓝绿色固体产物3a~c。 1.3.1 4,6-二氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶（3a） 蓝绿色固体3a ，产率49.88 %。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：8.43（d, 2 H），7.53（d, 1 H）7.43~7.46（m, 2 H）MS（FAB）m/z：216（M+1）+。 1.3.2 4,6-二氨基-5-亚硝基-2-(4-甲基)苯基嘧啶（3b） 蓝绿色固体3b，产率51.55 %。MS（ESI）m/z：230（M+1）+。 1.3.3 4,6-二氨基-5-亚硝基-2-(4-氯)苯基嘧啶（3c） 蓝绿色固体3c，产率62.23 %。MS（ESI）m/z：250（M+1）+ : 252（M+3）+=3 : 1。 1.4 对硝基苯乙腈（4）的合成[7,8] 将50 mL浓HNO3和50 mL浓H2SO4混