大赛璐手性柱注意事项.pptVIP

注意事项及常见问题 多糖涂敷型 键合型 CR（+），MA（+） AGP 其他 正相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为Hexane/IPA=90/10，室温保存。 反相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为H2O/ACN=60/40～80/20，室温保存。 IA,IB和IC等键合柱可用于正相，也可用于反相。但需要小心过渡，通常用异丙醇。 IA修复方法：先用EtOH小流速冲洗30min，再用DMF，小流速冲洗3小时，然后EtOH过渡，验柱。若效果不好，再用EtOH冲洗30min，然后THF冲洗2小时。 IB，IC修复方法：用乙酸乙酯冲洗30min-120min，在室温下保存2天或更久。验柱。 CR（+） MA（+） 安装色谱柱前，整个仪器管路先用纯水清洗，再用流动相清洗。 CR（+），甲醇的含量低于15%. 样品中不含钾离子。使用后保存在纯水中，放置于冰箱。 MA（+），甲醇或乙腈的含量低于15%.硫酸铜aq.保存。 CR（+） MA（+） CR（+）-出峰不断提前，或没有保留。 这是填料流失的表现，主要是由于甲醇的比例超过15%或是系统中进了有机溶剂造成的，以上情况造成的填料流失是不可逆的损坏，柱子将无法修复。 可能造成此现象的原因： 泵的抽力不正常 配制的高氯酸水溶液密度不均匀 流动相中甲醇的比例超过15% 在使用前未用纯水彻底冲洗整个系统 样品溶解过程中使用了甲醇等有机溶剂，或者油状样品中有有机溶剂残留 流动相及样品溶液中有K+存在 AGP IPA含量最好低于25%，其他有机相含量最好低于15%. 建议使用温度：20℃-25℃. pH范围：4-7. 缓冲盐溶液浓度不超过100mM. 问：手性柱谱图中异构体的分离度下降了，可能是什么原因，该怎么办？ 答：分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。 首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。 问：手性柱谱图中的峰出现裂分，可能是什么原因，该怎么办？ 答：峰裂分的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。有时样品溶液浓度太高，进样量太大也会裂缝，这种情况只需减少浓度进样量即可。 如果排除了各种外在因素，那么色谱柱本身的原因可能是柱头被污染，或者柱压太高导致柱头塌陷。 柱头污染的话，可以按照说明书采用不同的溶剂溶剂冲洗色谱柱，最好是反方向冲洗；或者更换保护柱。 如果是压力太高导致柱头塌陷，那么除了增补填料，基本没有其他方法补救了，只能更换色谱柱。 问：基线不稳定可能是哪些原因，如何解决？ 答：1.仪器刚从反相置换到正相系统时，基线会不稳定，只需要多平衡一会儿即可。 2.检测器污染。卸下检测器，更换透镜；或者取出透镜，用甲醇、异丙醇、水或其他溶剂（根据该仪器平时的使用情况而定）超声清洗。安装时注意透镜的方向，一面是平面，一面凸透。 3.确认使用的两元（或三元四元）流动相彼此互溶性良好。 4.确认正使用的流动相和仪器之前刚用过的流动相彼此互融；若不互融，需要选择合适的溶剂过渡。 5.若噪音很大，有可能是需要更换氘灯。 6.柱压不稳定导致的基线不稳?? 问：柱压不稳定的原因可能有哪些，如何解决？ 答： 1泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，可用注射器抽出空气。 2比例阀失效，更换比例阀即可。 3泵密封垫损坏，更换密封垫即可。 4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，通常是超声法脱气。 5系统检漏，找出漏点，密封即可。 6梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 问：正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？ 答：该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线分离。采用流动相溶解即可。 通常手性分析时，若流动相为H/I，H/E体系，且Hexane不超过85%，则溶解样品时可用流动相，也可用100%醇直接溶解。谱图通常差别不大。但是对小极性样品和流动相，尤其hexane超过90%时，一定注意用流动相溶解。 问：样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？ 答： 1. 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。 2.流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。 3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在MA（+）柱上出现较多。 4.酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚