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实验一 普通光学显微镜 生物教研组 0536-5641736 一、目的要求： 1．了解显微镜的构造和性能 2．掌握显微镜的使用方法 二、实验重难点 重点：1.认识掌握显微镜的结构 2.掌握显微镜的使用方法 难点：显微镜的使用方法 三、实验内容和方法 1、显微镜的结构 1、显微镜的结构 1）机械装置:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持 调节 固定等作用. 2）光学系统:目镜 、 物镜 、 聚光器、反光镜等. 它使检视物放大,造成物象. 低倍镜：它的视野的实际范围最大，易于发现目标，但不易看清微生物个体的形态。 高倍镜：搞倍镜视野的实际范围较低倍镜小些。可以看清个体较大的微生物个体或菌丝体形态，但个体较小的微生物以及其内含物和特殊结构也无法辨清。 油镜：一般在镜头上有黑圈或红圈表示的为油镜物镜，也有的以“OI”或“HI”字样表示，油镜的镜面很小，工作距离很近。使用时，在载玻片和油镜物镜之间加上一低油（常用香柏油）（而使用低倍、高倍镜时，是隔以空气）。当光线通过载波片时，由于玻璃与香柏油的折射率相近，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，这样就可以增加照明度，是镜检物清晰（参见表1）。 2、显微镜的性能 显微镜分辨能力的高低取决于光学系统的各种条件，取决于物镜、目镜及聚光镜的性能。 主要有以下几个因素： 物镜的数值孔径（NA） ：从聚光镜发出的锥形光照射到观察标本上能被物镜所聚集的量。 NA=nsinθ 其中n为物镜与标本之间介质的折射率； θ由光源投射到透镜上的光线和光轴之间最大的夹角。 表1 光线通过几种介质的折射率（n）比较： 分辨力： 显微镜标本中相互接近的两点可被清晰分辨出来的能力。 D=λ/2NA 其中λ为入射光波长 NA为物镜的数值孔径 D为显微镜的分辨力 放大率:物镜放大率（V1）与目镜放大率（V2）的乘积 V=V1V2 油镜使用的原理 1. 香柏油的折射率与玻璃接近，提高了视野的照明度。 2 . 提高了显微镜的分辨率 3、显微镜的使用 1 ）安放 右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边10厘米处。 2 ）对光 镜筒升至距载物台1~2厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。 若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮。 3 ）安装标本 将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。 5）低倍镜观察 待见标本必须先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大，已发现目标和确定检查位置 将待检标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推动器，使观察标本处于接物镜正下方。眼由左侧水平测视显微镜平台，转动粗落选，使接物镜下降之距标本约0.5cm处由接目镜观察。然后慢慢地提升镜筒 ，直到视野内出现物像后，改用细调节器， 调节到物像清楚为止，认真观察标本各部位，找到目的物并将其移到视野中心，准备用高倍镜观察。 6）高倍镜观察 将高倍镜转正至镜筒正下方。在转换时，需用眼在侧面观察，避免镜头与玻片相幢。从接目镜观察，再仔细调节光圈。使光线明亮度适宜。同时用粗调节器慢慢提升镜筒至出现物像后，改用细调节器调节至物像清楚为止。找到最适当于观察的部位区，移至视野中心，准备用油镜观察。 7）油镜观察 （1）将油镜转至正下方，用粗调节器将油镜头升约距平台2cm。 （2）手执玻片标本，在镜检部位滴上一滴香柏油，小心将此玻片进入显微镜平台。 （3）小心下降镜筒：以粗调下降镜头，此时从侧面注视油镜慢慢浸在香柏油中，几乎与标本相碰，特别注意：不能将油镜头压在标本上，更不能用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。 （4）从目镜观察，进一步调节光线，使视野达到最高程度（全开虹彩光圈）。 （5）用粗调节器将镜筒徐徐上升（此时不准下降镜筒）。直到视野出现模糊物像为止，然后再用细调节器校正焦距。如果油镜头已离开泽面而仍未见物像，用粗调节器将油镜升高距平台约2cm后，必须在从侧面观察，将油镜下降重复，上述操作到物像看清为止。 8)观察完毕，上旋镜筒，取出标本片之后，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后沾取少许二甲苯。擦去镜头上残留油迹，