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人前列腺癌PC3细胞亚群分离及其生物学行为分析 　 作者：曲珊珊 李荣贵 苏学今 张海英 王洋 李玉林 【摘要】 目的 研究人前列腺癌PC3肿瘤细胞系中是否存在具有干细胞特征的细胞亚群，并对其形态及克隆生长特征进行分析，同时探讨染料Rho123着色强度是否可用于区分不同的肿瘤细胞亚群。方法 采用Rho123染色后流式细胞仪分析;Rho123与DAPI复染后荧光显微镜下形态学观察及细胞克隆生长特征分析等方法。结果 PC3细胞中存在对Rho123着色显著差异的两类细胞亚群，其形态结构、增殖能力及克隆生长方式均有明显差别。结论 人前列腺癌PC3细胞系中存在具有干细胞特性的细胞亚群，对Rho123拒染的特性可用于区分肿瘤干细胞与其他肿瘤细胞。 【关键词】 前列腺癌;罗丹明123;肿瘤干细胞 　　【Abstract】 Objective To identify the characteristic of cancer stemlike cells in prostatic carcinoma PC3 cell line, and analyze the morphous and clone growth, investigate the method of discriminating the different tumor cell subpopulation by Rhodamin123 dye. Methods The PC3 cells stained with Rhodamin123 dye were analyzed by flow cytometry; the cells morphous and clone growth stained with Rhodamin123 and DAPI were observed by fluorescent microscope. Results Two different tumor cell subpopulation existed in PC3 cell line, and the morphous, reproductive activity and colon growth were significantly different in the two cell subpopulation. Conclusions Cancer stemlike cell subpopulation exists in prostatic carcinoma PC3 cell line, the character of some cells excluding Rhodamin123 dye can be used to discriminate tumor stem cells and other tumor cells. 　　【Key words】 Prostatic carcinoma; Rhodamin123; Cancer stemlike cells 　　 研究表明，肿瘤细胞群体中只有一小部分细胞具有形成新肿瘤的能力而被称为肿瘤起始细胞(tumorinitiating cell，TIC)，由于具有自我更新和分化潜能也被称为癌干细胞(cancer stem cell，CSC)。这部分细胞的显著特征是具有极强的潜在增殖、侵袭和迁移能力，对辐射和化疗药物不敏感，是肿瘤转移和复发的根源〔1〕。迄今已先后在白血病及乳腺癌、神经胶质瘤、结肠癌等实体肿瘤中证实了CSC的存在，并发现了一些CSC的生物标志物。但CSC生物标志物也为正常组织干细胞所共有，而且分离后培养极易分化。因此迫切需要寻找一条CSC分离的捷径。罗丹明(Rho)123为亲脂性荧光染料，可快速通过细胞膜，在细胞内主要分布于带负电荷的线粒体基质。高表达ABCG2/BCRPl的细胞可连续将Rho123泵出细胞而拒染，Rho123弱染的特征已被成功用于分离白血病干细胞〔2〕。本研究利用细胞对Rho123着色差异这一特征，采用流式细胞术分析前列腺癌PC3细胞是否存在Rho123高与低染色亚群，并比较两个亚群的差异性，探讨Rho123淡染细胞是否具有CSC特性。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 人前列腺癌细胞株PC3 为吉林大学白求恩医学院病理教研室保存，F12培养基为Gibco产品，标准胎牛血清购自天津血液病研究所，胰蛋白酶为Amresco产品，Rho123、DAPI购自碧云天公司。 　　1.2 仪器 荧光倒置显微镜为Leica公司产品，倒置显微镜为Olympus公司产品，流式细胞仪为美国BD公司产品。 　　1.3 细胞Rho123染色强度的流式细胞分析方法 细胞培养在含10%胎牛血清的F12培养基中，置于5%CO2、