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PPARγ在肝外胆管癌中表达及其意义 　 作者：刘兵 王文斌 王安峰 吕海涛 刘明 【摘要】 目的 观察PPARγ mRNA和蛋白在肝外胆管癌组织中的表达，并探讨其与肝外胆管癌临床病理特征之间的关系。方法 采用RTPCR和Western印迹检测PPARγ mRNA和蛋白在30例肝外胆管癌组织中的表达情况。结果 RTPCR法检测结果显示肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无淋巴结转移组PPARγ mRNA表达分别为0.47±0.06和0.24±0.07，差异有统计学意义(Plt;0.01);低分化组和高中分化组PPARγ mRNA表达分别为0.3±0.19和0.17±0.01，差异无统计学意义(Pgt;0.05);Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期肝外胆管癌组织PPARγ mRNA表达分别为0.63±0.35和0.63±0.28，差异无统计学意义(Pgt;0.05)。Western印迹结果显示肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无淋巴结转移组PPARγ 蛋白表达水平分别为2.0±0.44和0.93±0.21，差异有统计学意义(Plt;0.01);低分化组和高中分化组中，PPARγ蛋白表达分别为0.87±0.23和0.96±0.15，差异无统计学意义(Pgt;0.05)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期，PPARγ蛋白表达分别为2.45±0.54和1.95±0.24，两组差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论 PPARγ 可能对肝外胆管癌的发生和发展起促进作用。 【关键词】 PPARγ; 肝外胆管癌;逆转录聚合酶链式反应;免疫印迹 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类由配体激活的核转录因子，参与调节脂质代谢与糖代谢、脂肪细胞分化和能量平衡、炎症反应、动脉粥样硬化及肿瘤细胞的分化与凋亡等生理和病理过程，其中PPARγ与肿瘤的关系已日益引起人们关注。研究发现，PPARγ位于机体多种信号传导的交叉点，相关文献已经证明PPARγ 配体( pioglitazone，PGZ) 对肝门胆管癌细胞系 QBC939 细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用，从而成为新的肿瘤治疗靶点〔1〕。然而，PPARγ在胆管癌组织中的表达尚无报道。本文利用RTPCR及Western印迹技术检测PPARγ mRNA和蛋白在肝外胆管癌中的表达情况，并探讨其表达与肝外胆管癌临床病理特征的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 手术切除并经病理证实的肝外胆管癌组织30例(腺癌26例，其中高中分化15例，低分化11例;黏液腺癌4例)，男18例，女12例，年龄37～74(平均57.2)岁。术前均未作放疗、化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗。Ⅰ期 11例，Ⅱ、Ⅲ期19例。淋巴结转移7例，无淋巴结转移23例。所有患者均取新鲜癌组织标本，取材后迅速投入液氮中冷冻保存。引物由上海生物工程有限公司合成。 　　1.2 RTPCR检测PPARγ mRNA表达 采用异硫氰酸胍一步法提取肝外胆管癌总RNA，反转录合成cDNA。PCR反应：PPARγ 引物序列为正义：5′GCA GTG GGG ATG TCT CAT AAT GC3′，反义:5′CAG GGG GGT GAT GTG TTT GAA C3′，产物长度为328 bp。GAPDH引物序列为：正义：5′GGAAGGTGAAGGTCGGAGT3′，反义：5′CCTGGAAGATGGTGATGGG3′，产物长度为231 bp。反应条件：94℃变性5 min，94℃ 50 s，54℃ 30 s，72℃ 30 s，35次循环后72℃延伸10 min。PCR产物于1.5%琼脂糖凝胶中电泳，90 V，40 min，紫外分析仪中观察并照相，凝胶分析软件定量。采用凝胶分析软件(BIO1D)分析各条带平均灰度值，以PPARγ与内参照基因GAPDH的灰度比值表示PPARγ mRNA相对表达量。 　　1.3 Western印迹检测PPARγ蛋白的表达 冰PBS洗涤后的组织加入蛋白裂解液，匀浆收集上清。蛋白定量后，经10% SDSPAGE后转移至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭4 h，加入1∶400一抗〔小鼠抗人PPARγ (E8)单克隆抗体，Santa Cruz公司〕4℃过夜，二抗室温孵育1 h 后，ECL发光。以PPARγ与βactin条带的比值表示PPARγ蛋白的表达量。 　　1.4 统计学方法 采用SPSS11.5统计软件进行分析;采用单因素方差分析(ANOVA)，数据采用x±s表示。 　　2 结 果 　　2.1 PPARγ mRNA表达与肝外胆管癌临床病理特征的关系 RTPCR检测结果显示：肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无转移组PPARγ mRNA表达水平分别为0.47±0.06和0.24±0.07，差异有统计学意义(Plt;0.01) (图1)。低