17βHSD15在乳腺癌及癌旁组织中表达及其及临床特征关系.doc

17βHSD15在乳腺癌及癌旁组织中表达及其及临床特征关系 　 作者：赵刚 路璐 宋东 范志民 【摘要】 目的 探讨15型17β羟化类固醇脱氢酶(17βHSD15)在乳腺癌和癌旁非恶性乳腺组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系。方法 运用免疫细胞化学法测定17βHSD15在乳腺癌及同一患者癌旁非恶性乳腺组织中的表达，并统计分析该酶表达与患者年龄、癌及癌旁组织雄激素受体 (AR)，雌激素受体α (ERα)，孕激素受体B (PRB)，CDC47 和肿瘤的分期，肿瘤的大小，阳性淋巴结数和月经状态之间的关系。结果 乳腺癌组织中17βHSD15阳性表达率(66.7%)明显低于癌旁正常组织(97.6%) (χ2= 27.431，Plt;0.000 1) 。AR和PRB表达在乳腺癌组织中明显高于癌旁正常组织(Plt;0.01,Plt; 0.05)。癌组织CDC47阳性表达率(77.4%)明显高于非癌组织 (15.5%) (Plt; 0.001)。AR和ERα(r=0.494 97，P=0.000 1);ERα和CDC47 (r=0.224 96,P=0.0397)表达存在明显相关性。结论 17βHSD15在乳腺癌中调控肿瘤组织内部雌激素和雄激素水平，在乳腺癌的发生发展过程中起到了非常重要的作用。 【关键词】 15型17β羟化类固醇脱氢酶;乳腺癌;免疫组织化学 现已发现人类乳腺癌组织中包含所有合成雌二醇(E2)的酶，包括芳香化酶、硫酸酯酶和17β羟化类固醇脱氢酶(17βHSD)家族〔1〕，其利用血液中的前体物质〔去氢表雄酮(DHEA)和硫酸去氢表雄固酮(DHEAs)〕合成E2。芳香化酶和硫酸酯酶分别催化雄烯二酮和硫酸雌酮转化为雌酮(E1),而17βHSD则在E1和E2相互转化中起重要作用〔2〕。Lin等分离并命名了一个新型的人类基因，即与SDR家族酶同源的前列腺短链脱氢还原酶1(15型17βHSD)〔3,4〕,此还原酶在前列腺组织里可以更有效催化从5 a双酮(5adione)到双氢睾酮DHT的转化过程，从而可获得一个新的合成双氢睾酮DHT途径而不需要睾酮参与〔5〕。目前国内外关于该酶的研究多集中在前列腺、胃和结肠等器官，尚未见报道该酶在乳腺及乳腺癌细胞系中以及在乳腺癌组织中的表达。本研究拟采用免疫组化方法检测17βHSD15在乳腺癌及同一患者癌旁组织中的表达,以探讨该酶表达与临床特征的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 对象 2009年1至5月进行乳腺癌手术的病人84例，年龄34～71(中位数52)岁,全部为女性,均进行了乳腺癌改良根治术。肿瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为16、50、18例。肿瘤直径lt;3 cm者47例，≥3 cm者37例。区域淋巴结状况：1～3个和gt;3个各为14例，未见淋巴结者56例。绝经前患者49例,绝经后32例,未知2例。术前均未进行过任何治疗。在取乳腺癌病人乳腺非恶性组织时，保证距离癌组织5 cm以上，以确保癌旁非恶性组织内无癌残留。切取的乳腺癌及癌旁非恶性乳腺组织于30 min以内采用4℃的4%多聚甲醛溶液(pH7.4) 固定24～48 h后用乙醇将标本脱水，并在甲苯中清洗，最后用石蜡包埋制成蜡块，同时在我院病理科明确病理诊断。病理结果除了序号第37、38两例为浸润性小叶癌，其余患者皆为浸润性导管癌。癌旁非恶性乳腺组织中乳腺结构正常,未见到癌组织或者是炎症反应。 　　1.2 试剂 17βHSD15特异性抗体由加拿大拉瓦尔大学分子内分泌实验室提供;阴性对照组抗体购自Zymed Laboratories Inc 公司，为兔同型对照抗体(产品号0826199);二抗购买自DakoCytomation 公司，为多克隆羊抗兔免疫球蛋白(编号P0448)。1∶1 000的抗体ER 和AR购自Santa Cruz公司，编号分别为SC543、SC816。1∶50的PRB和1∶500的CDC47购自加拿大蒙特利尔Medicorp公司，编号分别为MS192、MS862。 　　1.3 免疫组化方法 将标本切成5 μm 厚切片,置于载玻片脱蜡、水化。加入3%过氧化氢甲醇溶液中作用15 min，PBS 冲洗。标本上滴加2 型17βHSD特异性抗体(稀释1∶500)，于4℃放置过夜。阴性对照组滴加兔同型对照抗体,同样放置过夜。之后加二抗(稀释1∶200) 在室温下温育4 h;DAB过氧化氢溶液浸泡5 min 显色，苏木精复染。ER、孕激素B(PRB)、AR由于都是核抗体，需用微波炉加热进行抗原活化。 　　1.4 结果判断 切片结果评价分别由本文中2名作者独立进行，不同的评分最终由小组共同阅片进行评分。评分依据组织中阳性细胞的比例，而不考虑组织染色强度。在癌旁组织中对乳腺上皮细胞阳性比例进行评价，而在乳腺