荔枝霜疫霉病病原鉴定及生物学特性研究.docVIP

荔枝霜疫霉病病原菌鉴定及生物学特性研究荔枝霜疫霉病(Peronophythora Litchi Chen et al.)是目前荔枝生产上的重要病害之一[1~2]，严重影响荔枝品质、产量以及鲜果的贮运和外销。发病初期果皮表面出现褐色或黑色的不规则病斑，后来迅速扩展蔓延至全果变黑，果肉腐烂，有酸味和酒味，并流出褐色汁液，病害发生至中后期，病部表面长出白色霜霉状物。叶片受害后出现褪绿斑块，以后病斑扩大成为不规则的黄绿色斑块空气湿度大时，病部会长出白色霜霉状物[3]。该病在广东、广西、福建、海南、台湾均有发生，不仅严重危害接近成熟的果实，也危害嫩梢、叶片、花穗、结果小枝、果柄及幼果，引起大量落花、落果、裂果和烂果，产量损失可达30%～80%[~5]。本文对荔枝霜疫霉病1.1 病原来源从澄迈县永发镇采集，组织分离获得菌株，进行单孢分离纯化菌种1.2 病原菌致病性测定 健康无病的，保湿24 h，设清水为对照，重复3次。 1.3 病原菌的27 ℃下在PDA平板上对病菌纯化培养，菌落 病原菌生物学特性测定1.4.1 温度对菌丝生长的影响 将菌移至PDA平板中央，分别置于5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、2 ℃、30 ℃35 ℃共8个梯度的恒温培养箱中培养 d和 d后，测量菌落的直径。每处理3个平板，重复3次（下同）。1.4.2 pH对菌丝生长的影响 用1 mol/L的HCl和NaOH调节PDA培养基的pH值，使之分别为3、4、5、6、7、8、9、10、11和1210个梯度。将菌饼移至pH梯度培养基平板中央，2℃的恒温箱中培养 d和d后，测量菌落的直径。1.4.3 碳源对菌丝生长的影响 用等量的蔗糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉、阿拉伯糖分别与PDA培养基中的葡萄糖等量置换，配制成不同碳源的培养基，将菌饼接种在培养基平板中央，置2 ℃的恒温箱中，培养d和d后，测量菌落的直径。1.4.4 氮源对菌丝生长的影响 用等量的甘氨酸、酵母浸膏、硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、牛肉浸膏、蛋白胨尿素分别与Czapek培养基中硝酸钠等量置换，配成不同氮源的培养基。将菌饼移至培养基平板中央，置于2 ℃的恒温箱中，培养 d和d后，测量菌落的直径。1.4.5 光照对菌丝生长的影响 将菌饼移至PDA平板中央，置于完全黑暗、12 h光暗交替完全光照3个处理条件下，于2 ℃恒温培养箱中培养 d和 d后，测量菌落的直径。1.4.6 致死温度和时间的测定 于45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃、恒温水浴锅中的试管内加入1 ml孢子悬浮液，处理 min、 min、15 min、20 min min、 min后迅速冷却，将孢子悬浮液滴于载玻片上保湿培养12 h后观察，镜检孢子萌发情况。2 结果和分析 2.1 致病性2.2 病原菌的）根据测病原菌形态特征有关文献，可初步确定此菌为荔枝霜疫霉[6~7]。 菌落形态 孢囊梗及孢子囊 图2 荔枝霜疫霉病菌 2.3温度对菌丝生长的影响 菌丝在10～3℃范围内可生长，适宜温度为20～30 ℃，最适温度为2 ℃，～15 ℃菌丝生长缓慢，菌丝停止生长（见图）。 图 温度对菌丝生长的影响 Fig.Effect of temperature on mycelial growth of peronophythoraceae litchi 2.4 PH对菌丝生长的影响 菌丝在pH ~12均能生长，适宜pH为~8，最适pH为pH大于时，对菌丝生长有抑制作用，说明性条件适合菌丝生长（见图） 图 pH对菌丝生长的影响 Fig. Effect of temperature on mycelial growth of peronophythoraceae litchi 2.5碳源对菌丝生长的影响 供试种碳源中菌丝显著（见）表 碳源对菌丝生长影响 Table1 Effect of carbon sources on mycelial growth of peronophythoraceae litchi 碳源 菌落直径/mm 4 d 7 d 乳糖 22.58CDd 45.25CDd 可溶性淀粉 30.13Aa 55.95Aa 山梨酸 27.08ABb 53.58Ab 甘露醇 27.80ABb 54.03Aab 麦芽糖 22.33CDd 44.13De 蔗糖 26.58Bbc 49.76Bc 葡萄糖 24.58BCc 46.58Cd D-果糖 8.38Ff 30.03Fg D-半乳糖 21.30Dd 44.78CDde L-阿拉伯糖 15.60Ee 36.40Ef 甘油 24.53BCc 48.83BC 注：不同的大写字母代表在1%的显著性水平