第08章 分光光度计线性分辨范围测定.pptVIP

生物化学实验 南京农业大学 生命科学学院 生物化学与分子生物学系 实验一 分光光度计线性分辨范围测定 一、实验目的 学习分光光度计的工作原理 掌握比色测定的基本操作 掌握标准曲线的制作及最佳浓度范围的确定 二、实验原理 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。 Lambert-Beer定律的适用范围 从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被部分吸收，其吸收多少与溶液浓度和溶液厚度（光径）成正比 对于同一台分光光度计而言，入射光光强不变；对于某一待侧物而言，摩尔消光系数为常数，当光径也保持不变时，吸光度与溶液浓度在一定范围内成正比 相对比较的概念 三、实验材料及设备 1、仪器 UV9100分光光度计 2、器材 普通试管：25 mL×9 移液管：2 mL×1 烧杯：250 mL×1 洗耳球、滴管：各 2 洗瓶、试管架、移液管架：各 1 四、试剂的配制 硫氰化铁（Fe(SCN)3）溶液 称取8.95 g KSCN 和 5.00 g FeCl3·6H2O ，蒸馏水溶解后定容至2 L 药品取用时务必规范操作！ 德国女科学家违规稀释浓硫酸导致毁容 五、操作步骤 1、教师现场演示如何使用分光光度计 2、取9支试管，按下表所示操作 六、结果处理 1、由0~8号管的数据，以硫氰化铁含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制曲线 自学使用软件绘制 2、根据曲线分析分光光度计线性分辨范围 七、思考题 1、在用分光光度计做比色测定时，标准溶液的浓度范围应怎样选定？待测样品溶液的浓度应稀释在什么范围？请自行讨论，说出你的理由。 2、比色时，设一个“0”号管的意义是什么？ * *