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组织DNA的提取与纯化 检验系生化教研室 陈宁 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 讲课内容 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一、概述 DNA在生物组织中以核蛋白的形式存在于细胞核中。 单倍体人类DNA平均相对分子量为6×1010 道尔顿，相当于1.3×105kb。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. DNA的分类有： 真核DNA 细菌DNA 病毒DNA 质粒DNA Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. DNA样品的来源： 组织 – 肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞 血液 细菌 – 培养细菌、质粒 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、实验原则 保证DNA一级结构的完整性 排出其他干扰性分子的污染 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 干扰分子 对酶有抑制作用的物质 样品中存在的其他生物大分子 有机溶剂、高浓度的金属离子等 蛋白质、多糖和脂类 应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度 相应抽提对象之外的核酸污染 DNA抽提时，应避免RNA干扰 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 相关因素对于核酸的影响： 机械剪切力、高温剧热环境 过酸、过碱的反应体系 各种核酸酶降解效应 物理因素 化学因素 生物因素 操作轻柔，切忌剧烈混匀、震荡；控制实验温度 pH 4~10 EDTA缓冲液 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 避免干扰因素的解决方法 简化操作步骤，缩短提取过程，减少各类因素对核酸的降解。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 三、实验操作及相关试剂介绍 【实验方法】 物理方式：玻璃珠法 超声波法 研磨法 冻融法 化学方式：异硫氰酸胍法 酚-氯仿抽提法 碱裂解法 生物方式：酶法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酚-氯仿抽提法 提取组织 组织匀浆 水相 (DNA,RNA) 絮状沉淀 (DNA,少量蛋白质,RNA) DNA 裂解液 苯酚-氯仿 离心 离心 离心 氯仿-异戊醇 5mol/L NaCl 冰无水乙醇 75%乙醇 TE Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 C