8第四章农药残留测定方法-2.docVIP

4.2 高效液相色谱4.2.1 概述 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)是20世纪60年代末期，在经典液体柱色谱的基础上，引入了气相色谱的理论和技术，并加以改进而发展起来的新型高效分离分析技术。高效液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。在技术上采用高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。高压是高效液相色谱法的突出特点，系统内压力可达15~35Pa。由于流动相流经色谱柱时，柱内填料细密，受到阻力很大，为使流动相迅速通过色谱柱，携带农药样品进入检测室，就必须对流动相施以高压。近年来由于化学键合固定相的出现，高效液相色谱柱效可达3万塔板/以上（气相色谱填充柱约为2000塔板/），使分离效率大大提高。 高效液相色谱法是现代农药残留分析不可缺少的手段。高效液相色谱仪也是农药残留分析实验室必备的仪器设备。它解决了热稳定性差，难于气化、极性强的农药残留分析问题。高效液相色谱法已经是气相色谱法的重要补充和多残留分析方法的一种重要选择 1. 高效液相色谱法104理论塔板数。近年来出现的微型填充柱（内径为1mm）和毛细管液相色谱柱（内径为0.05mm），柱效超过了每米105理论塔板数，能够实现极为有效的分离。 高速 由于使用高压泵输送流动相；采用梯度洗脱装置；用检测器在柱后直接检测洗出液成分等原因，HPLC完成分离分析的时间只需几分钟到几十分钟，比经典液相色谱法要快得多。 高灵敏度 紫外、荧光、电化学等高灵敏度检测器的使用，使HPLC的灵敏度可与气相色谱法媲美。 高度自动化 现代先进的高效液相色谱仪配有计算机，不仅能够自动处理数据、打印分析结果，而且能够对仪器的全部操作包括流动相的选择、流速、柱温、检测器波长选择，以及进样、梯度洗脱方式等进行程序控制，成为全自动化的仪器。 不受分析试样挥发性和相对分子质量的限制，可用于分离高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的农药残留及其代谢物的检测。 2. 基本原理 液相色谱法主要被分成两个类型：平面色谱（薄层色谱和纸色谱）和柱色谱。柱色谱可分为经典柱色谱（低压）和高效液相色谱（高压）。高效液相色谱法又可分为4种主要类型：液固吸附色谱LSC）；液液分配色谱LLC），主要是键合相色谱法BPC）；离子交换色谱IEC）；空间排阻色谱法SEC）。与经典的柱色谱法不同，高效液相色谱法采用高压泵，填充微粒固定相的短柱，并且随着组分的流出检测器就可以将样品的浓度记录下来。高效液相色谱法原理与经典的柱色谱法相同，它的进步主要依赖于色谱仪硬件的开发。高压泵能保证当压力不断升高的情况下，流量的精度没有变化同时有大量的各种类型和规格的色谱柱供选用。 高效液相色谱法分离模式可分为种基本形式（见图4-）。建立农药残留分析的高效液相色谱方法，选用哪种分离模式取决于被分析农药的结构、性质以及对样品中所含有的干扰物质的分离（见图4-）。一般讲，高效液相色谱法分析测定农药残留量以液液分配色谱的键合相色谱法最为常用。在这种分离模式中，根据固定相和流动相相对极性有2种操作方式： 正相色谱法NPC)：固定相的极性比流动相大，非极性组分先流出色谱柱；随着流动相极性的降低，被分析的组分保留时间增加。 反相色谱法RPC)：固定相的极性比流动相小。绝大多数极性组分先流出，随着流动相极性的增加，被分析的组分保留时间延长。反相高效液相色谱法是农药残留分析最常用的一种操作方式。 ⑴. 液固色谱法通常也叫吸附色谱法。流动相为液体，固定相为吸附剂，固定相常用硅胶为的液相色谱法。样品中各组分因对固定相表面吸附作用的差异，得以分离和分析。色谱柱内充填固体吸附剂，利用吸附剂表面活性中心进行吸附，试样不进入固定相内部。流动相带着被测组分进入柱子时，吸附剂不仅对不同的组分具有不同的吸附力，而且对流动相分子也具有一定的吸附作用，在吸附剂表面各组分分子之间及各组分分子与流动相分子之间发生吸附竞争保留值由这两种因素决定。液固吸附色谱法的特点. 适合可溶于有机溶剂的非离子型化合物的分离，特别是异构及有不同极性的取代基的化合物的分离.分析结果重复性差，柱稳定性不好.样品组分吸附在吸附剂的活性部位有变质和损失的可能。色谱法流动相和固定相都是液体的液相色谱法。样品组分在互不相溶的两种液相中分配系数的不同得以实现分离和分析。流动相和固定相为两种互不相溶的液体，两者之间有一个明显的分界面，流动相流过色谱柱时，很大面积上与固定相接触，流动相中的样品组分在两相之间很快进行平衡分配，由于它们在两相之间相对溶解度的差异，以不同速度流经色谱柱，从而得到分离液液色谱的特点：.可使用多种溶剂，固定液抗冲刷能力强，不需要预饱和，再现性能非常稳定.分离适用性广，从非极性化合物到极性化合物，都可以作其