层析柱的一些总结.docxVIP

多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、制革工业中也有广泛用途热稳定性 将酶液分别置于不同的温度条件下（30℃，40℃，50℃，60℃，70℃）保温 10min 后，立即在 0℃冰浴中冷却，然后在 40℃下测碱性蛋白酶活力，以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。测量三个重复求平均值，将最高的酶活力定义为 100%，分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与最高酶活性的比值。以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－1，上阳离子柱，一般缓冲液ph范围在6.5～8.5之间，与PI值相差1个PH是比较理想的。如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（50ul左右得体积就够了），看那个PH下挂得好。强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定，所以他的优点是不同pH下载量恒定，可控性好，平衡过程快速、简单。弱离子交换介质的缺点：适用的pH范围比较小，随着pH不同载量发生变化。但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。因此强/弱离子交换介质都可以使用弱离子交换介质（DEAE、ANX、CM)优点在于：和强离子交换介质的选择性不同，因此我们一般先使用强离子交换，如果优化条件还是达不到理想的分离效果，可以尝试弱离子交换，用选择性不同的介质尝试一下。因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同，可以说是对不同蛋白的结合力有差异。S技术规格离子交换剂类型Q Sepharose FF????????????????????季氨基，强阴离子DEAE Sepharose FF??????????????二乙基氨基乙基，弱阴离子ANX Sepharose 4FF??????????????二乙基氨基丙基，弱阴离子SP Sepharose FF??????????????????? 磺丙基，强阳离子CM Sepharose FF??????????? ???? ???羟甲基，弱阳离子离子容量Q Sepharose FF????????????????0.18-0.25mmol（Cl-）/mlDEAE Sepharose FF???????????????0.11-0.16mmol（Cl-）/mlANX Sepharose 4 FF???????????????0.13-0.18mmol（Cl-）/mlSP Sepharose FF????????????????0.18-0.25mmol（H+）/mlCM Sepharose FF?? ??????????????0.09-0.13mmol（H+）/ml动态载量Q Sepharose FF??????????????????? 120mg HSA/ml 填料DEAE Sepharose FF???????????????? 110mg HSA/ml 填料ANX Sepharose 4 FF?? ???????????5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料SP Sepharose FF??????????????????70mg RNAase/ml 填料CM Sepharose FF??????????????????50mg RNAase/ml 填料?压力/流速Q Sepharose FF?????400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmDEAE Sepharose FF????300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmANX Sepharose 4 FF?? 至少200cm/h，100kpa，XK50/60层析柱，柱床高25cm SP Sepharose FF?????400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmCM Sepharose FF??? ?300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm平均颗粒大小? ????????????????? ?90um（45-165um）?基质Sepharose FF??????????????????? 高度交联琼脂糖，6%Sepharose 4 FF??????????????????高度交联琼脂糖，4%?PH稳定性Q Sepharose FF????????????????1-14（短期），2-12（长期）DEAE Sepharose FF??????????????1-14（短期），2-13（长期）ANX S