Survivin在结肠腺癌中表达及意义.docVIP

Survivin在结肠腺癌中表达及意义【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2010）12-0008-02 作者简介：李维山，病理学硕士，主治医师/讲师。鄢文海，病理学及病理生理性博士，教授，硕士研究生导师。 本课题受河南省科技厅课题资助，课题号 豫科计[2009]1号 【摘要】目的:研究Survivin结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系，并探讨Survivin蛋白在结肠腺癌中的表达的相关性。方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术（S-P法）检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Survivin蛋白的表达水平。 结果:Survivin在正常结肠中的表达率分别为20%，在结肠腺癌中的表达率分别为69.5%， Survivin蛋白在结肠腺癌中的表达增加(P＜0.05)； Survivin蛋白在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成负相关(P＜0.05)；与浸润深度，肿瘤的大小，患者的年龄，淋巴结有无转移均无相关性(P0.05)。结论:Survivin在结肠癌中表达增加提示 Survivin对结肠癌的发生发展起着重要作用。 【关键词】结肠肿瘤； 凋亡； Survivin；组织芯片；免疫组织化学 结肠癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发病率居恶性肿瘤的第4～6位。近年来其发病率有上升的趋势，据有关研究，细胞凋亡紊乱可能是其发生的重要原因[1, 2]。Survivin是目前已知的最强的凋亡抑制因子，其在结肠癌中的表达状况虽已有报道[3]，但结果并不完全一致，本实验利用组织芯片技术，在一张玻片上一次性完成本研究所采集的组织标本的免疫组织化学标记，检测59例结肠腺癌中Survivin的表达，探讨它们在结肠腺癌中的表达情况及意义。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源:本研究的病例均来自济源市人民医院和济源市第二人民医院病理科2006-2008年存档材料。59例结肠腺癌均经复查和确诊。患者年龄35岁-65岁，平均45岁。其中高分化16例，中分化25例，低分化18例；并选取正常结肠10例作为对照。标本经10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋。 1.1.2 试剂:兔IgG多克隆抗体Survivin（进口分装），以及SP两步法试剂盒和DAB显色剂均购自北京中杉生物公司； 1.2 方法 1.2.1 组织芯片的手工制作:用手电钻（钻头外径1.8mm）在2.5cm×2cm的空白蜡块上构建10×9个点阵，间距2mm。所选的石蜡标本，经过显微镜下定位后，用手工改造过的腹穿针（内径1.8mm）把目标组织穿刺取下圆柱状标本，分别种植到对应的点阵中，并根据坐标记录标本所对应的病理编号。然后在38度恒温箱中烘烤2个小时，使与空白蜡块融合为一体。切片厚度5um，芯片信息完全丢失的病例，使用完整切片。 1.2.2 石蜡切片和免疫化学:以PBS代替一抗作为空白对照，已知阳性切片作为阳性对照，采用sp两步法，按照免疫组织化学检测试剂盒(抗兔、抗小鼠)说明书指导步骤进行染色：将构建的芯片蜡块以5um厚连续切片，常规脱腊至水，3% H?2O?2 15min阻断内源性过氧化物酶活性，置入有0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）的高压锅内加热进行抗原修复（从高压锅开始慢慢喷气时,计时3min），迅速冷却后洗涤。滴加一抗Survivin(1:50),后湿盒中孵育，4℃冰箱中过夜，PBS充分洗涤，DAB显色。苏目素复染，盐酸酒精分化，脱水、透明、水溶性树脂封片，光镜下观察。 1.2.3 结果分析和判断:采用双盲法，评判标准由两位有经验的病理医师分别对免疫组化染色结果进行评估，Survivin阳性信号以细胞浆和/或细胞核出现淡黄色至棕黄色为阳性。根据阳性细胞占全部肿瘤细胞或实质细胞的百分比及着色程度判断结果：无明显阳性反应细胞或阳性细胞数10%为阳性[4]。 1.3 统计学分析:采用SPSS11.5软件包（SPSS Inc，Chicago, USA）进行t检验、χ2检验和单向方差分析（One-way ANOVA）。当P＜0.05时，其差异有统计学意义。 2 结果 2.1 Survivin在结肠结肠腺癌和正常结肠中的表达:Survivin在 59例结肠腺癌中 41例表达，表达率为69.5％，在对照组10例中3例表达，阳性信号主要定位于细胞质，部分位于细胞核呈弥漫分布。（表1，图1、2） 图1 Cytochrome C蛋白在结肠癌细胞中呈阳性表达，阳性信号分布在细胞浆，呈棕黄色颗粒。(S-P法免疫组化染色，DAB显色，×400)； 图2 Cytochrome C蛋白在正常结肠黏膜上皮细胞中呈阴性表达。(S-P法免疫组化染色，DAB显色，×