南美蟛蜞菊毛状根诱导及其离体培养.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, March 25; 26(3): 378−385 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2010 CJB, All rights reserved. 组织工程与细胞培养 南美蟛蜞菊毛状根诱导及其离体培养 1,2 1 3 欧少云 ，施和平 ，曾宝强 1 华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室，广州 510631 2 清远职业技术学院，清远 511510 3 香港教育学院科学与环境学系，香港新界 摘 要: 为了探讨利用南美蟛蜞菊毛状根来改良其观赏性状和生产次生物质，研究了南美蟛蜞菊 Wedelia trilobata (L.) A.S.Hitche 毛状根的诱导及其离体培养过程中培养基 N 源、碳源、磷和钙的消耗变化。结果表明，发根农杆菌 Agrobacterium rhizogenes ATCC15834 感染南美蟛蜞菊幼嫩叶片外植体7 d 后从其叶片切口中脉处产生毛状根。毛状根 能在无外源激素的培养基上自主生长。PCR 扩增结果显示发根农杆菌Ri 质粒的rol B 和rol C 基因已在南美蟛蜞菊毛 状根基因组中插入、整合并得到表达。毛状根液体培养0~7 d 内处于生长迟滞期、7~21 d 为快速生长期、21 d 后进入 生长平台期。在毛状根液体培养过程中培养基的蔗糖、硝态氮、PO43−、Ca2+被逐渐吸收和消耗，培养至 7 d 时，蔗糖 被消耗近 50 ％；硝态氮含量只剩下起始硝态氮含量的5.8 ％；至35 d 时，蔗糖和硝态氮含量分别约为其起始浓度 的3.39 ％和1.82 ％。与Ca2+ 浓度变化不同的是，培养基的无机磷被快速消耗，培养至7 d 时其浓度约为其起始浓度的 1.76 ％；但培养至35 d 时培养基中仍残存有占起始浓度约61.3 ％的Ca2+ 。该结果为今后利用南美蟛蜞菊毛状根来改良 其观赏性状和设计合适的培养基来规模培养生产其次生物质提供了可能性。 关键词: 发根农杆菌，南美蟛蜞菊，毛状根，氮源，钙 Induction and in vitro culture of Wedelia trilobata hairy roots 1,2 1 3 Shaoyun Ou , Heping Shi , and Eric Pokeung Tsang 1 Guangdong Provincial Key Laboratory of Biotechnology for Plant Development , College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China 2 Qingyuan Polytechnic College, Qingyuan 511510, China 3 Department of Science and Environmental Studies, the Hong Kong Institute of Education, New Territories, Hong Kong Abstract: To study the possibilities for improvement of the or