神经导向因子Slit2修饰骨髓间充质干细胞的表达研究.docVIP

神经导向因子Slit2修饰骨髓间充质干细胞的表达研究 柴源1 ，蒋莱2 ，周玉云1 ，王晓鹤1 ，马学玲1 摘要： 目的 基因修饰骨髓间充质干细胞，使其神经导向因子Slit2蛋白表达稳定增多，从而使骨髓间充质干细胞更好地促进脑缺血后血管生成，显著改善神经功能恢复。方法 采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞，P3代细胞进行流式细胞仪鉴定，通过激光共聚焦显微镜观察其Slit2蛋白分布情况。利用脂质体转染技术，将pSecTagB/hSlit2-C-myc重组质粒转入骨髓间充质干细胞，经过Zeocin稳定筛选后，通过RT-PCR及Western blot检测骨髓间充质干细胞中重组Slit2蛋白的表达情况。结果 1、成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞并通过流式细胞仪鉴定。2、通过激光共聚焦显微镜发现Slit2蛋白在骨髓间充质干细胞的细胞膜基金项目：国家自然科学基金；教育部高等学校博士学科点专项科研基金新教师类（20122307120031）作者单位：（1. 哈尔滨医科大学第四临床医学院，黑龙江 哈尔滨150000；2. 齐齐哈尔医学院附属第三医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000）通讯作者：马学玲，E-mail:marlenexl@163.com及细胞质中均有表达。3、成功将pSecTagB/hSlit2-C-myc重组质粒转染骨髓间充质干细胞。4、RT-PCR及Western blot证实无论在基因水平或者蛋白水平，Slit2在转染后 基金项目：国家自然科学基金；教育部高等学校博士学科点专项科研基金新教师类（20122307120031） 作者单位：（1. 哈尔滨医科大学第四临床医学院，黑龙江 哈尔滨150000；2. 齐齐哈尔医学院附属第三医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000） 通讯作者：马学玲，E-mail:marlenexl@163.com 关键词 ：Slit2；骨髓间充质干细胞；基因修饰；血管生成 中图分类号：R743 文献标识码：A Research of axon guidance cues Slit2 expression in gene modified bone marrow mesenchymal stem cells Abstract： Objective To stably up-regulate the expression of axon guidance cues Slit2 by gene modify bone marrow mesenchymal stem cells, promote it more effectively regulate angiogenesis, significantly improved functional recovery after cerebral ischemia. Methods Using density gradient centrifugation method to separate and culture rats bone marrow mesenchymal stem cells, then select the third generation cells for flow cytometry identified. Using confocal laser scanning microscope to observe Slit2 expression of rat bone marrow mesenchymal stem cells. Transfect the pSecTagB/hSlit2-C-myc recombinant plasmid into rat bone marrow mesenchymal stem cells by liposome, after Zeocin screen, reverse transcription-PCR and western blot were used to detect Slit2 expression in bone marrow mesenchymal stem cells. Results 1、Bone marrow mesenchymal stem cells were successfully cultured and identified by flow cytometry.2、The confocal laser scanning microscope showed that the Slit2 proteins were expressed both in cell membrane and cytoplasm.3、Success