反相高效液相色谱法测定尿中对氨基苯酚.pdfVIP

反相高效液相色谱法测定尿中对氨基苯酚 梁 力* 蔡伯祥 陶俊强 杨春英 江（苏省职业病防治研究所 南京 210037） 1 前言 振荡5min，2000r/min离心5min。取2. mL有机相 在我国，每年都有大量的工人接触苯胺。现已证 于5mL试管中，75℃水浴吹N2挥干。再用0.1mol/ 明，随着苯胺在体内吸收量的增加，其代谢产物对氨 LHCl1.mL重溶，涡旋振荡lmin，经0.2滤膜 基苯酚 PAP）也相应增加。因此尿中PAP的含量可 过滤后进HPLC。 以反映接触苯胺的程度。对尿中PAP的测定，国内 尿样处理 于 1mL具塞比色管中加2. mL 外尚未有标准方法，但有资料介绍用盐酸萘乙二胺 尿样，0.50mLlmo1/LHC1，于沸水浴上水解lh。后 比色法[]和薄层色谱法[2]。用高效液相色谱法测定 续步骤与 “校正曲线测绘”相同。标准PAP及尿样的 尿中的PAP，国内少见报道，国外也很少[3]。本文用 色谱图见图1。 高效液相色谱法测定尿中PAP，对水解、萃取及色 谱条件进行了试验。 2 实验部分 2.1仪器与试剂 仪器：PharmaciaHPLC分析仪附UV可变波长 检测器、双笔记录仪；KH-851旋涡混合器。 试剂：对氨基苯酚 北（京化工厂），乙酸乙酯、 H3PO4NaOH、甲醇，均为分析纯试剂。 2.2溶液配制 pH7.3缓冲溶液：由KH2PO4和Na2HPO4配 2.5 计算 制而成。 将样品峰高值代入校正曲线的直线回归方程即 PAP标准溶液：准确称取 .100gPAP于小烧 可求得尿中PAP浓度。 杯中，用0.1mol/LHCl溶解，定量转入100mL容量 瓶中，用 .1mol/LHCI定容至刻度。 3 结果与讨论 2.3色谱条件 3.1水解方法 SpherisorbC18，3,50mm 4.6mmi.d.,甲醇 尿中结合的PAP必须先水解为游离形式，才能 ∶水 H3PO4=22 78 0.1体（积比），流速： 有效萃取。水解方法有酸化下蒸馏、酶水解等。与这 0.4mL/min，检测波长：220nm。灵敏度：0.08，进样 些方法相比，本文参考文献[1]用具塞比色管将尿样 量：1OL。 于其中酸化加热水解，可不用冷凝回流装置，尿中 2.4 分析步骤 PAP又不会随蒸气挥发损失。一次可同时水解多个 校正曲线测绘 于3支1mL具塞比色管中加 样品，适于大批量样品操作。 入 PAP标准溶液 5L，1L，50L蒸馏水 3.2萃取条件 2.mL，1.mol/LHCl0.5mL，盖上塞子，置沸水 在常用的几种有机溶剂中，PAP在乙酸乙酯中 浴中加热 1h。取出放冷，用NaOH调至中性后加 溶解度最大，故选乙酸乙酯为萃取剂。 2.mLpH7.3缓冲溶液，