猪脂联素球状结构域犵犃犱基因在乳酸乳球菌中的表达-畜牧兽医学报.PDFVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３３ ３５３３５７ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 猪脂联素球状结构域犵犃犱基因 在乳酸乳球菌中的表达 １ ２ １ ２ ３ １ １ １ 刘霭莎 ，李 岩 ，胡文锋 ，吴同山 ，李加琪 ，陈真伟 ，江冠尧 ，黎 立 　 　 （ 华南农业大学食品学院生物工程系 应用微生物研究室，广州 ； １． ５１０６４２ 广东省东莞市畜牧科学研究所，东莞 ； 华南农业大学动物科学学院，广州 ） ２． ５２３０８６ ３． ５１０６４０ 摘 要：本研究旨在克隆猪脂联素球状结构域 犃犱基因，构建重组质粒并将其转化至乳酸乳球菌 ＮＺ９０００中进行 　 犵 表达，并在体外对重组猪脂联素球状结构域进行生物学活性分析。提取猪脂肪组织总 ＲＮＡ，扩增得到脂联素基因 全长并测序，设计引物引入酶切位点和 Ｈｉｓｔａ，把 犃犱亚克隆到表达载体 ＮＺ８０４８，将重组质粒转化乳酸乳球菌 ｇ 犵 ｐ 中诱导表达。通过 ２＋ 亲和层析柱对重组蛋白纯化后再 检测。然后，将 蛋白注射 ＮＺ９０００ Ｎｉ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ ｇＡｄ 到高糖饲喂的小鼠体内鉴定生物学活性。结果表明成功获得了犵犃犱基因并在乳酸乳球菌 ＮＺ９０００中表达，表达产 物相对分子质量约 １７ｋｕ。经纯化后用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检验具有反应原性，动物试验证明制备的ｇＡｄ蛋白能显著 降低小鼠的血糖水平。本研究为利用外源重组脂联素球状结构域调节猪的脂肪代谢打下了良好的基础。 关键词：猪；脂联素；球状结构域；乳酸乳球菌 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８２８Ｑ３４４．１３ Ａ ０３６６６９６４２０１２０３０３５３０５ 　　　　 　　　　 犈狓狉犲狊狊犻狅狀狅犳犘狅狉犮犻狀犲犌犾狅犫狌犾犪狉犃犱犻狅狀犲犮狋犻狀犌犲狀犲犻狀犔犪犮狋狅犮狅犮犮狌狊犾犪犮狋犻狊 狆 狆 １ ２ １ ２ ３ ， ， ， ， ， ＬＩＵＡｉｓｈａ ＬＩＹａｎ ＨＵＷｅｎｆｅｎ ＷＵＴｏｎｓｈａｎ ＬＩＪｉａｉ ｇ ｇ ｑ １ １ １ ， ， ＣＨＥＮＺｈｅｎｗｅｉＪＩＡＮＧＧｕａｎａｏ ＬＩＬｉ