玉米联合固氮菌KosakoniaradicincitansGXGL-4A的分离鉴定与固氮.PDF

微生物学通报 Nov. 20, 2016, 43(11): 2456−2463 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.151071 研究报告 玉米联合固氮菌Kosakonia radicincitans GXGL-4A 的分离 鉴定与固氮特性研究 * 李琼洁 程杰杰 孙帅欣 陈云鹏 ( () 200240) 摘 要：【目的】固氮微生物是生物固氮的主体，其菌种的选育更是生物固氮研究的基础。本 实验室分离鉴定出一株新的固氮菌，并对其固氮相关活性进行初步研究。【方法】固氮菌采用 Ashby 无氮培养基进行分离纯化。通过形态特征分析、生理生化特征分析、16S rRNA 基因序 列分析和基因组扫描对固氮菌进行鉴定。利用靛酚蓝-分光光度法检测固氮菌的泌铵能力。固 氮酶活性的测定使用乙炔还原法。【结果】从玉米根部分离到一株固氮菌株GXGL-4A ，菌体短 杆状，大小约为 1.5 µm×0.5 µm，单个或常见2 个菌体细胞串联在一起，革兰氏染色结果为阴 性。16S rRNA 基因序列分析结果表明该菌株与Kosakonia oryzae Fo8A1d 16S rRNA 基因序列有 95% 的相似性，结合形态特征、生理生化特征和基因组扫描，将其命名为 K . radicincitans GXGL-4A。对其进行固氮基因nifH 的检测，经PCR 扩增得到预期的296 bp 条带；采用靛酚 蓝-分光光度法，测得发酵液中铵态氮含量为2.5 mg/L ，表明该菌株具有较好的泌铵能力。乙炔 还原法测其固氮酶活性，以乙烯生产量表示，结果显示GXGL-4A 菌株在无氮培养基上能够有 效地还原乙炔，达到232.94 nmol C H /(mL·h) 。【结论】菌株GXGL-4A 是一株可较好地分泌铵 2 4 的新的固氮菌，具有很好的研究价值。 关键词：玉米，固氮菌，分离鉴定，Kosakonia radicincitans GXGL-4A Isolation, identification and characterization of associative nitrogen-fixing endophytic bacterium Kosakonia radicincitans GXGL-4A in maize * LI Qiong-Jie CHENG Jie-Jie SUN Shuai-Xin CHEN Yun-Peng (School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiao Tong University, Key Laboratory of Urban Agriculture (South), Ministry of Agriculture, Shanghai 200240, China) Abstract: [Objective] Nitrogen-fixing microorganisms are the main comp