鸭空肠液中消化酶粗提纯方法的比较研究-动物营养学报.PDF

动物营养学报２０１３，２５（１０）：２３６３２３７０ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１３．１０．０２０ 鸭空肠液中消化酶粗提纯方法的比较研究  张　莉　赵　峰 　严　峰　米宝民　张宏福 （中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京 １００１９３） 摘　要：本试验旨在比较硫酸铵沉淀－透析 －冻干－脱脂法与低温浓缩－透析 －冻干－脱脂 法制备鸭空肠液消化酶粉剂的差异。采用两样本完全随机设计，将８Ｌ鸭空肠液随机分成２组， 每组４个重复，每个重复１Ｌ肠液。第１组采用硫酸铵沉淀－透析－冻干法，第２组采用低温浓 缩－透析－冻干法，分别制备消化酶粉剂，然后对２组制备的粉剂进行脱脂，比较脱脂前和脱脂 后２种方法制备消化酶粉剂的消化酶活性与回收率、总蛋白浓度与回收率及化学成分含量的差 异。结果表明：１）低温浓缩－透析－冻干法制备的消化酶粉剂中淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的 活性比硫酸铵沉淀－透析－冻干法分别高３４．８％、２７．９％和１２．１％（Ｐ＜０．０５）；相应地，３种消 化酶回收率及总蛋白回收率比硫酸铵沉淀－透析 －冻干法分别高３４．８％、３５．２％、１５．３％和 １２．６％（Ｐ＜０．０５）；粗蛋白质及粗灰分含量显著低于硫酸铵沉淀－透析－冻干法（Ｐ＜０．０５），而 粗脂肪含量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。２）经脱脂处理后，低温浓缩－透析 －冻干－脱脂法制备的 消化酶粉剂中淀粉酶、胰蛋白酶活性比硫酸铵沉淀－透析 －冻干 －脱脂法分别高１１．５％和 ７．９％（Ｐ＜０．０５），而糜蛋白酶活性差异不显著（Ｐ＞０．０５）；淀粉酶和胰蛋白酶回收率比硫酸铵 沉淀－透析－冻干法分别高３９．４％和４３．９％（Ｐ＜０．０５），而糜蛋白酶回收率差异不显著（Ｐ＞ ０．０５）；总蛋白回收率显著高于硫酸铵沉淀－透析－冻干－脱脂法（Ｐ＜０．０５），而总蛋白浓度差 异不显著（Ｐ＞０．０５）；粗蛋白质及粗灰分含量显著低于硫酸铵沉淀－透析 －冻干－脱脂法（Ｐ＜ ０．０５），而粗脂肪含量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。由此可知，从纯化过程的全程看，低温浓缩－透 析－冻干－脱脂法中淀粉酶、胰蛋白酶活性和回收率均显著高于硫酸铵沉淀－透析－冻干－脱 脂法。 关键词：北京鸭；空肠液；消化酶；纯化 中图分类号：Ｓ８３４　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１３）１０２３６３０８ 　　在体外模拟消化中，模拟消化液的制备一直 酶提取时，多采用盐析、透析及超滤等方法进行前 ［１］ 是核心技术之一。据ＣｒéｖｉｅｕＧａｂｒｉｅｌ等 报道，从 处理，再根据目的酶蛋白的不同，采用不同型号规 生长猪与肉鸡体内获得的胃蛋白酶在酶学特性 格的凝胶层析柱进行过滤，以相应的缓冲液洗脱 上，如针对不同底物的最适 ｐＨ、消化能力等方面 并收集峰浓度时的消化酶进行提纯，如淀粉 ［２－３］ ［４－７］ ［６－７］ ［８］ 有较大的差异。由此可见，在模拟消化液中，主要 酶 、胰蛋白酶 、糜蛋白酶 、脂肪酶 等 消化酶所来源的动物种属与模拟对象的动物种属 多采用该方法。通过这些方法提纯酶蛋白时，随 相一致是提高模拟消化液仿真程度的关键因素之 着步骤的增加酶蛋白的损失提高，活性回收率降 一。因此，寻求一种快速、有效获取动物体内消化 低。而且，这些方法获得的酶蛋白的回收率变异 酶的方法迫在眉睫。目前，在对动物体内的消化 较大，不利于消化酶制备的质量控制。因此，探讨 收稿日期：２０１３－０４－１６ 基金项目：基本科研业务费专项（２０１１ｙｑ