重组人干扰素α1b制造和检定规程.pptVIP

重组人干扰素α1b制造及检定规程 Requirements for Recombinant Human Interferon α1b ;1 定义、组成及用途 ;2 制造 ;2.2 工程菌菌种 2.2.1工程菌菌种名称及来源 重组人干扰素α1b工程菌株系由人干扰素α1b基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。生产用工程菌株需经国家药品管理当局批准。 2.2.2 种子批建立、传代及保存 从原始种子批传代、扩增后用适当方法保存，作为主种子批；从主种子批传代、扩增后用适当方法保存作为工作种子批。 2.2.3 菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.2.3.1 划种LB琼脂平板 应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。 2.2.3.2 涂片革兰氏染色 在光学显微镜下观察，应为典型的革兰氏阴性杆菌。 ;2.2.3.3 对抗生素的抗性 应与原始菌种相符。 2.2.3.4 电镜检查 应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2.2.3.5 生化反应 应符合大肠杆菌生物学性状。 2.2.3.6 干扰素表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.2.3.7 表达的干扰素型别 应用抗α型干扰素参考血清作中和试验，证明型别无误。 2.2.3.8 质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 ;2. 3 原液制备 2.3.1 种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种适宜的培养基培养，供发酵罐接种用，种子液应进行质粒稳定性检查。 2.3.2 发酵用培养基 采用适宜的培养基。其中不含任何抗生素。 2.3.3 种子液接种及发酵培养 2.3.3.1 在灭菌培养基中接种适量种子液。 2.3.3.2 在适宜的温度下进行发酵，发酵条件如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等应根据该菌种批准的发酵工艺进行。 2.3.4 发酵液处理 用适宜的方法收集处理菌体。 2.3.5 初步纯化 采用国家药品管理当局批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。 2.3.6 高度纯化 经初步纯化后，采用国家药品管理当局批准的工艺进行高度纯化，使其达到本规程2.4项要求，即为干扰素原液。加入稳定剂人血白蛋白后称为“加白蛋白干扰素原液”。冻存于-30oC。 ;2.4 原液检定 按3.1项进行。 2.5 半成品配制与分批 2.5.1 配制与除菌 2.5.1.1 稀释液配制 按国家药品管理当局批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。 2.5.1.2 稀释与除菌 将检定合格的加白蛋白干扰素原液用2.5.1.1项稀释液稀释至所需浓度，用0.22μm滤膜过滤除菌，即为半成品，保存于2～8oC。 2.5.2分批 按本版规程通则《生物制品分批规程》进行。 ;2.6 半成品检定 按3.2项进行。 2.7 分装及冻干 按本版规程通则《生物制品分装规程》进行。 2.8 规格 应为国家药品管理当局批准的规格。 2.9 包装 按本版规程通则《生物制品包装规程》进行。 ;3 检定 ;3.1.5 分子量 用还原型SDS法。加样量应不低于1μg，制品的分子量应为19.4KD±10%。 3.1.6 外源性DNA残留量 用固相斑点杂交法，以地高辛标记的核酸探针法或经国家药品检定机构认可的其他敏感方法测定。其含量应不高于10ng/剂量。 3.1.7 IgG残留量 如采用单克隆抗体亲和层析法纯化，应进行本项检定。采用双抗体夹心酶联免疫法测定。IgG含量应不高于100ng/剂量。 3.1.8 宿主菌蛋白残留量 用酶联免疫法测定。宿主菌蛋白残留量应不高于总蛋白质的0.1%。 3.1.9 残余抗生素活性 不应有残余氨苄青霉素活性。 3.1.10 细菌内毒素含量 按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》测定。细菌内毒素含量应不高于10EU/30万IU。 ;3.1.11