用同功酶研究欧洲赤松在有性无性-统计研究.PDF

遗 传 学报 8(3):275-281,1981 Acta CeneticaSinica 用同功酶研究欧洲赤松在有性、无性 繁殖下的遗传结构’‘ 沈 熙 环 北（京林学院） 同功酶作为基因的生化标志在林业科研中的应用已有约十年的历史131。 如 Rudin[91 用欧洲赤松的种子和针叶研究了谷氨酸草酸转氨酶 (GOT）和亮氨酸氨基肤酶 (LAP）的 酶谱，并对自由授粉、控制杂交、自交子代进行了遗传分析。Bergmann11,21用雌胚子体， Lundkvist[63用针叶对欧洲云杉的LAP作了类似的研究。Mitton[71用不同时期采集的叶 子提取物，确定了美国西部黄松六种酶的多态性。Kin[51最近对阔叶树种山毛棒研究了 LAP和磷酸酶的遗传规律。Sakai等10〔,1〕和Feret[41分别发现日本罗汉柏、柳杉，和台地松 等天然林分内与林分间同功酶类型的变异。Tigerstedt3’确定欧洲云杉分布区中心和边 缘地带间同功酶类型频率的不同。Muller-Starckrs，以及 ShenHsihuan1121沈（熙环）等用具 有特别谱带的无性系研究了欧洲赤松种子园中的自交率和花粉的传播等问题。宫崎安贞 等[171由同一柳杉植株不同部位采集针叶，分析获得了相同的过氧化物酶谱，认为同功酶可 用于鉴定无性系。Torres等114-16]对海枣、柑桔和鳄梨分析了醇脱氢酶、脂酶、GOT,磷酸 葡萄糖异构酶等，认为同功酶可用于果树品种分类。 为了解欧洲赤松在不同繁殖条件下同功酶的遗传特点及实践意义，本试验对欧洲赤 松种子园中的：1)控制单交子代的针叶；2）同一无性系的三个不同嫁接植株上采收的 自由授粉种子；3）控制单交子代的扦插植株的针叶试样，分析了LAP,GOT和谷氨酸 脱氢酶 (GDH)，并对分析结果作了讨论。 材 料 与 方 法 控制杂交是于1970年在瑞典uummeea0郊区的。stteg欧洲赤松种子园中进行的。该园 位于北纬63040，东经20015。杂交种子于1974年播种，1975年定植，作子代鉴定。供 试杂交组合为AC2050XAC1065。针叶是从六年生植株上采集的。 自由授粉种子是于 1979年秋采自上述种子园。种子分别由AC1065的三个嫁接植 株上采集。植株分别叫做 AC1065A,AC1065B和 AC1065C。植株树龄25年，树高约 7米。三个植株在种子园中呈三角形分布。A,B和C三植株相距分别为31,61和55米。 供试样品是树冠各部位的混和种子。 扦插繁殖试样也是1970年在上述种子园中进行的杂交子代。组合为AC1016X 本文于1980年9月巧 日收到。 1)本试验是作者访问瑞典期间在瑞典农业科学大学森林遗传和植物生理组同功酶实验室完成的，曾得到有关人 员的协助和提供试验材料，谨表示谢意。 276 遗 传 学 报 8卷 AC1017。杂交种子于 1978年播种于人工气候室，该室每年有三个生长季。部分繁殖材 料于 1979年移人温室。控制杂交材料由瑞典林木改良研究所北方站提供；扦插材料由 T.Aid。博士提供。 同功酶分析前，种子预先在保持湿润的滤纸上培养2-4天。剖取胚乳和胚，分别放 入直径为8mm的有机玻璃小研臼中。其中加有 pH值为7.4的Tris-borateEDTA缓冲 液0.2mlo 针叶除另作说明者外，均是生长季采集的二年生或当年生针叶；针叶经斗℃贮藏数 天，或采集后直接匀质处理。经贮藏后的针叶，有时对 GOTB位点的分析有影响。称取 针叶300mg，放人预先冷藏的小研臼中，其中加有Tris-borateEDTA缓冲液3ml和聚乙 烯毗咯烷酮 (PVP)300mg和为0.2mm的玻璃珠半牛角勺 约（0.5ml)，匀浆后经3900X 9离心处理半小时。分析时用上清液润湿小片滤纸。用滤纸进行电泳分析。 用淀粉凝胶。胶中含水解淀粉12务，用Ashton缓冲液配置。Ashton缓冲液配方如 下：甲液：0.191M硼酸，0.050MLiOH；乙液：0.051MTris,0.008citricacid