嗜酸耐热菌的测试方法—doehler.docVIP

起草人Prepared By 审阅人Reviewed By 批准人Approved By 1、 目的Purpose: 本文件规定了微生物检测方法. 、适用范围Scope: 适应于微生物检验、 职责Responsibility 检验员按各产品规格书和检验方法的要求执行日常的检验工作； 质量部负责日常检验工作的督导。 程序 Procedure:用无菌将液在平板上涂抹均匀将涂抹好的平板平放于桌上20—30min将平板Doehler 2.04717.782)。 4.28.3.2 放在80±1℃水浴锅里热激活样品10分钟 4.28.3.3冰水浴冷却样品至40℃～45℃ 4.28.3.4 放进45℃±1℃的培养箱中培养至少3天 4.28.3.5 然后用接种环吸取足够量的培养后的样品，在做好BAT平板中划线；同时接种足够量的培养后的样品，在做好的PCA平板上划线。 4.28.3.6 将划好线的BAT和PCA平板40个培养管（2mL 诱发培养液） 2)溶液1：50mL 缓冲液，pH 4.0 3)溶液2：900uL H2O2溶液（蓝色瓶盖） 4)溶液3：酶试剂 （褐色小瓶褐色盖）。在第一次使用前用900uL 蒸馏水均匀溶解。酶制剂制备后应当储存在2-8°C且在3-4个月必须用完。 5)溶液4:2份愈创木酚标样（黄色瓶盖，1050ppm 愈创木酚） 4.28.4.2. 测试 4.28.4.2.1 样品： 1)将足够量的被检菌落用灭菌接种环接种到BAT-诱发培养液中，45±1°C培养24小时。 2)将1mL 溶液1加入到培养管中，摇匀。 3)加入20uL 溶液2 4)加入20uL 溶液3(稀释后的)。 5)摇匀培养管中的溶液，室温下放置5-10分钟。 4.28.4.2.2阴性空白试验步骤同8.6.2.1， 但不接种菌落。 4.28.4.2.3 阳性空白试验： 1)加入40uL 溶液4 到BAT-诱发培养液中。 2)加入1mL 溶液1 3)加入20uL 溶液2。 4)加入20uL 溶液3。 摇匀培养管中的溶液，室温下放置5-10分钟。 观察培养管内对照溶液颜色的变化。 4.28.4.3 分析: 4.28.4.3.1 如果样品颜色变化显著且褐色色泽深于阴性空白，表明检测到饮料中有致败的嗜酸耐热菌，其产生使饮料变异味的物质（愈创木酚） 的风险很大。 4.28.4.3.2 如果培养管和阴性空白的颜色变化相同，则表明饮料中没有致败嗜热耐酸菌存在或产生异味物质的风险很低。 4.28.4.3.3 如果颜色变化不明显，则建议增加培养时间到24小时。 附：愈创木酚测试颜色变化: 1, negative control阴性 2, positive control (guaiiacol)阳性 3, A. acidiphilus嗜酸乳杆菌 A. acidoterrestris酸土脂环酸杆菌 Alicyclobacillus sp. 脂环酸芽孢杆菌 德乐食品饮品配料（上海）有限公司 Doehler Food Beverage Ingredients (Shanghai) Co., Ltd. 文件名称 Document Name 微生物品控操作手册 文件类型 Document Type 作业指导书 Working Instruction 生效日期 Effective date 文件编号 Document No. 版本号 Version No. 页码 Page 2012.8.23 DL-WI-LD-003 03 2 of 4 1 2 3 4 5 5