微生物分离培养与接种技术.pptVIP

微生物的分离培养和接种技术;实验目的、要求;实验原理;0.9;实验仪器、材料;实验内容;3、分离1）涂布法 用一支新的无菌枪头，由低浓度开始，从各浓度土壤稀释液中各吸取100ul，对号较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用灼烧冷却后的无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做3个平板（重复）。 2）倾注法 用一支新的无菌枪头，由低浓度开始，从各浓度土壤稀释液中各吸取100ul，对号较均匀地放入已写好稀释度的空白无菌平皿中，然后在各平皿中加入已经融化并冷却到45 -50℃的牛肉膏蛋白胨培养基（已灭菌）12-15ml，将培养皿在超净工作台面上轻轻转动，使稀释的菌悬液与融化的培养基混合均匀，直至培养基凝固。 注意：无菌操作；用枪头吸取菌悬液时注意“吹打数次”确保混匀。 4、培养 待平板上液体被完全吸收，将平板倒置于370C温箱中培养24h；;5、菌落计数含菌样品的微生物经稀释分离培养后，每一个活菌细胞可在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，故可据平板上菌落的数目推算出每克含菌样品中所含的活菌总数（菌落形成数目）。 每克含菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数）/含菌样品克数 ;菌落计数规则： 选择平均菌落数在30~300间的平板 1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）： 1）若0.5≤比值≤2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。 2）若2≤比值或比值≤ 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。 3、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 4、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 所有菌落数均不在30~300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 ;6、挑菌划线分离 挑取单个菌落（细菌菌落），分别在平板上做分区和连续划线。 370C培养48h检查菌落是否单纯。 划线方法：详见实验指导书P72、P237 无菌操作（ 近火焰处操作）： 接种环灼烧灭菌、冷却 左手取涂布分离培养后平板 右手用接种环挑取涂布分离培养的平板中的目的单菌落 用已经粘有菌体的接种环 于另一新的空白平板中划线 分区划线法：灼烧、冷却、取菌 区1划线 灼烧、冷却 区2划线 区3划线 灼烧、冷却 区4划线…… 完毕、灼烧 连续划线法：灼烧、冷却、取菌 连续划线 完毕、灼烧 ;结果与讨论