第四章色谱定性与定量.pptVIP

第四章 色谱的定性和定量方法;一、色谱的定性分析;（1）气相色谱中用保留值定性的方法; 已知物增加峰高法定性原理：在得到未知样品的色谱图后，往未知样品中加入一定量的已知物质，在同样色谱条件下的两色谱图对比图谱比较峰高。;②利用相对保留值定性 ;③利用保留指数定性 表示物质在固定液上的保留行为，是目前使用最广泛并被国际上所公认的定性参数，它具有定性可靠，重现性好，标准统一等优点。 可将储存在计算机中的标准保留指数转换成用户色谱条件下的保留指数和保留时间（tR）;（A）定义 （B）保留指数的测定 保留指数的准确度和重现性都很好，用同一色谱柱测定误差小于1%，因此只要柱温和固定液相同，就可以用文献上发表的保留指数定性。 ;（2）液相色谱中用保留值定性的方法;利用文献的数据进行对比和定性分析 注意HPLC的柱填充技术的复杂性，定性受到限制 ; 最简单的方法：标准添加法 前提：要有标准物 判断的标准：加入标准样后，使未知样色谱峰增高，改变色谱条件，未知峰仍能增高;同时用其他方法 其他色谱方法（改变机理，如：用不同的色谱柱） 其他检测器 PDA，光谱图比较、谱库检索 确认色谱峰的纯度 - 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份 -检查是否有共流出的物质（杂质）干扰 色谱峰纯度确认的方法 -用光电二极管矩阵检测器比较光谱图 -峰纯度鉴定，四波长比例 MS，质谱图解析、谱库检索 其他仪器方法;（3）平面色谱中用保留值定性的方法 ;2.联机定性;二、色谱定量分析;（一）定量分析基础;即： 式中： –组分i的质量 —组分i的浓度 —组分的校正因子（与检测器的性质和被测组分的性质有关） —组分i的峰面积， —组分i的峰高;2.峰面积的准确测定;第二法：三角形法 式中：BM—三角形的高 Wi—三角形KML的半高宽，近似等于色谱峰高0.607处的峰宽 ;2)不对称峰峰高和峰面积的测量 第一法：峰高×峰宽的平均值 式中：h—峰顶到峰底线的垂直距离 ?（b0 .15+b0.85)—峰高0.15处和峰高0.85处的峰宽平均值;第二法：峰分割计算后加和法 A=A1+A2 =h1×b1+h2×b2 第三法：大峰上的小峰峰面积的测量 第四法：基线漂移时色谱峰峰面积的测量 第五法：重叠峰峰面积的测量 ;3.定量校正因子的测定; 绝对校正因子fi的大小主要由操作条件和仪器的灵敏度所决定，既不容易准确测量，也无统一标准；当操作条件波动时，fi也发生变化。故fi无法直接应用，定量分析时，一般采用相对校正因子。 ;（2）相对校正因子（校正因子）： 式中：f -- 相对校正因子 ，简称为校正因子，无因次量 fi , fs—i 物质、基准物质（s）的质量（或浓度) Ai(hi),As(hs)---物质、基准物质的峰面积（或峰高） ; 根据物质量的不同表示方法，校正因子分为：;②摩尔校正因子(fM) 定义：物质的量用摩尔数表示，表示单位峰面积所代表的组分摩尔数 式中：Mi , Ms-被测物质、基准物质的摩尔质量 ;③体积校正因子（fv） 定义：物质的量用体积表示,表示单位峰面积所代表的组分体积。 式中：Vi , Vs—表示被测物质、基准物质的体积 ;(3)相对响应值sˊ 相对响应值是物质i与标准物质S的响应值（灵敏度）之比。单位相同时，与校正因子互为倒数，即： 与只与试样、标准物质以及检测器类型有关，而与操作条件和柱温、载气流速、固定液性质等无关，是一个能通用的常数。 ;（4）校正因子的实验测量方法 ;例： 某试样合有5μg乙醇，测得相应的色谱峰面积为150mm2，求乙醇的fi。 解：;例： 准确称取一定质量的色谱纯对二甲苯、甲苯、苯及仲丁醇，混合后稀释，采用氢焰检测器，定量进样并测量各物质所对应的峰面积，数据如下： 物质 苯 仲丁醇 甲苯 对二甲苯 m/μg 0.4720 0.6325 0.8149 0.4547 A/cm2 2.60 3.40 4.10 2.20 以仲丁醇为标准，计算各物质的相对质量校正因子。 ;帽