一种来源于链格孢菌的MAPK激酶.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（６）：５２～５７ 一种来源于链格孢菌的ＭＡＰＫ激酶 ＡｔＰＢＳ２基因的克隆及功能分析 １ ２ ３ ３ ３ 冯　飞 　纪春艳 　杨秀芬 　曾洪梅 　邱德文 （１仲恺农业工程学院生命科学学院　广州　５１０２２５　２华南农业大学植物病理学系　广州　５１０６４３ （３中国农业科学院植物保护研究所蛋白药物工程实验室　北京　１０００８１） 摘要　通过遗传学手段，构建了细极链格孢菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）ｃＤＮＡ酵母表达文库并筛选获 得ＭＡＰＫ激酶ＡｔＰＢＳ２基因，该基因全长２４９２ｂｐ，编码６８３个氨基酸。ＡｔＰｂｓ２ｐ与来源于烟曲霉 （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ）的ＡｔＰｂｓ２ｐ（ＸＰ＿７５２９６１）、粗糙脉孢菌（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａｃｒａｓｓａ）的ＮｃＰｂｓ２ｐ（ＸＰ＿ ９６５７２７）、稻瘟菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ）ＭＧＣＨ７（ＸＰ＿００１５２２９４６）及酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＳｃＰｂｓ２ｐ（ＥＤＮ６３２５４）序列分别具有５２％、５２％、４９％和４７％的相似性。在高渗环境下，ＡｔＰＢＳ２基因 与酵母的ＳｃＰＢＳ２基因功能相同，具有耐高渗透压环境的能力。细极链格孢菌（Ａ．ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）中存在 ＨＯＧ通路信号途径，ＡｔＰＢＳ２基因可能与链格孢菌（Ａ．ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）的逆境适应性调节密切相关。 关键词　ＭＡＰＫ激酶　细极链格孢菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）　ＨＯＧ途径　ＰＢＳ２基因 中图分类号　Ｑ７８５ 　　蛋白质的磷酸化与去磷酸化过程是生物体中普遍 境适应性强，是重要的植物病原菌又是常见的腐生菌。 存在的一种调节机制，涉及多种细胞信号转导过 近年来研究发现，细极链格孢菌能分解硫化橡胶并在 ［１～７］ ［１８］ 程 。丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ 合成纤维上存活 ，同时能够对胁迫反应作出应答。 ｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）在真菌诸多信号传导过程中发挥了重 因此，该菌具有适应不同环境的调节机制。然而到目 要作用［８～１１］。迄今为止，已发现２２个 ＭＡＰＫ基因，与 前为止，ＨＯＧ信号途径与链格孢菌环境适应性、遗传背 真菌生长发育、胁迫、致病性等有关。酿酒酵母 景、致病性等方面的关系研究尚无报道。为进一步了 （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）通过高渗透压甘油信号途径 解ＨＯＧ通路在细极链格孢菌生长发育以及致病性等 （ｈｉｇｈｏｓｍｏｌａｒｉｔｙｇｌｙｃｅｒｏｌｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＯＧ）合成甘油以提 方面的调节机制，本文通过构建细极链格孢菌ｃＤＮＡ酵 ［１２］ 母表达文库并对其进行筛选而获得ＭＡＰＫ激酶ＡｔＰＢＳ２ 高细胞内部的渗透压，应对高盐等高渗透压环境 。 ＨＯＧ途径中的 ＭＡＰＫＫＫ激活其下游的 ＭＡＰＫＫ，即 基因，研究了其功能，以期阐明ＨＯＧ信号途径在细极 Ｐｂｓ２（ｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ２），Ｐｂｓ２再激活 ＭＡＰＫ 链格孢菌适应环境胁迫的调节机制奠定基础。 （Ｈｏｇｌ）从而激活下游转录因子，调控酵母适应渗透压 ［１３］ １　材料与方法 胁迫 。近年来，与酵母ＨＯＧ通路重要蛋白激酶同源 的编码基因已在多种丝状真菌中被分离和研究。结果 １．１　菌　株 发现，Ｐｂｓ２ｐ与人类真菌性病害及植物病原真菌的发育 　　酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ｐｂｓ２基因缺失突变菌株 分化及致病性密切相关，是研究病原真菌毒力及侵染 Ｕｖａ１８由中国农科院植保所蒋伶活博士惠赠。 致病的重要途径［４，１４～１７］。