抗人红细胞单链抗体与猪瘟e2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, January 25; 26(1): 28−34 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved. 动物及兽医生物技术 抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2 蛋白双功能融合蛋白的 构建及生物学活性检测 1 1 1 1 2 1 1 覃绍敏 ，白安斌 ，吴健敏 ，廖文军 ，袁书智 ，华俊 ，关忠谊 1 广西兽医研究所，南宁 530001 2 惠朋动物药业有限责任公司，南宁 530001 摘 要: 为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白，本研究采用重叠延伸PCR 方法将2E8ScFv (抗人红细胞H 抗原单链抗体基因) 和 mE2 (猪瘟病毒 E2 蛋白主要抗原编码区基因) 拼接成融合基因 2E8mE2 ，并插入原核表达载体 pET-DsbA ，将重组表达质粒pET-DsbA-2E8mE2 转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3) PlysS 中进行IPTG 诱导表 达，表达的融合蛋白经SDS和Western blotting 分析鉴定，结果表明：2E8mE2 融合基因在大肠杆菌中获得了表 达，表达产物以包涵体形式存在，分子量约为65 kDa ，与预期的大小一致。分别采用亲和层析法和谷胱甘肽再氧化法 对融合蛋白进行纯化和复性，红细胞凝集试验证实：2E8mE2 融合蛋白复性效果良好，既能够与人红细胞结合，又能够 与猪瘟病毒抗体反应，具有双功能特性。 关键词: 猪瘟病毒，单链抗体，双功能蛋白，原核表达，红细胞凝集试验 Preparation and bioactivity of anti-human red blood cell ScFv and CSFV E2 bifunctional fusion protein 1 1 1 1 2 1 Shaomin Qin , Anbin Bai , Jianmin Wu , Wenjun Liao , Shuzhi Yuan , Jun Hua , and Zhongyi Guan1 1 Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning 530001, China 2 Hui Peng Animal Drugs Co. Ltd., Nanning 530001, China Abstract: The aim of this study is to construct a bifunctional fusion protein, which can conjugate both human red blood cells and antibodies against classical swine fever virus (CSFV). We respectively amplified 2E8ScFv and mE2 genes from different recombinant vectors, in which 2E8ScFv gene is the single chain Fv gene against H antigen of human red blood cells, whereas mE2 gene is the main antigen coding region gene of CSFV E2 protein. We used overlap extension PCR to obt