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TAB检测方法 美国库格方法（K氏培养基） 1、 设备及材料 1.1 天平 1.2 水浴锅 1.3 灭菌三角烧瓶 （500ml, 250ml） 1.4 酒精灯 1.5 抽滤装置（过滤器和抽滤机） 1.6 0.45μm滤膜（φ50mm） 1.7 医用镊子 1.8 灭菌平皿（φ90mm） 1.9 培养箱 2、培养基的制备 2.1 在1L烧瓶里放入如下配料 蒸馏水或去离子水 900ml 酵母浸膏（OX） 2.5g 0.25% 蛋白胨（MERK） 5.0g 0.50% 葡萄糖（MERK） 1.0g 0.10% 吐温80 1.0g 0.10% 琼脂粉（北京奥博星） 15g 1.5% 在121℃、15磅压力下高压灭菌15min，放置于46℃水浴里。 取2.5g苹果酸于100ml的烧杯里，加蒸馏水或去离子水100ml混匀并通过0.22μm滤膜过滤除菌。 2.2苹果酸溶液到调制的K-培养基里并小心混合，调整培养基pH值为3.7±0.1，注入酸化的培养基到灭菌平板里，让其凝固备用。 3、操作步骤 3.1、检样处理 3.1.1 称取10克浓缩苹果清汁于250ML三角烧瓶里，加蒸馏水或去离子水90ML。 3.1.2在80℃水浴上摇动加热13min（当样品温度达到80℃时开始记时） 3.1.3在冷水里迅速冷却样品。 3.2过滤培养 3.2.1样品通过0.45微米的滤膜真空过滤。 3.2.2移去过滤器的顶部，用无菌镊子从过滤器上移取滤膜放置在K-培养基平板 上。 3.2.3轻轻按压滤膜，使滤膜与培养基之间没有气泡，保证与培养基接触。 3.2.4将平板正面朝上置于41℃的培养箱内培养5天。 4、菌落计数：计算滤膜上的菌落数。 5、结果报告：报告每10克样品所含的菌落数。 二、美国雀巢方法（K氏培养基） 1、仪器和试剂 A 、仪器 1.1 80(C水浴锅 1.2 温度计 1.3 10ml移液管 1.4 培养皿, 60 x 15 mm, #1007, B-D, Falcon Plastics, Oxnard, CA 1.5 43(C 的培养箱 1.6 带盖子的灭菌试管和试管架, 20 x 150 mm 1.7 0.45um滤膜,灭菌的微孔过滤器, TYPE HA, #HAWG047S0, Millipore Corp., Bedford, MA 01730 1.8塑料袋 1.9显微镜,微生物载玻片,盖玻片 微孔过滤器，灭菌镊子 B 化学药品 1.1苹果酸 1.2灭菌的50 ml 蒸馏水空白 1.3为洗涤过滤器和真空设备的灭菌蒸馏水 C、试剂 A） 蛋白胨 5 g 酵母粉 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 吐温80 1.0 g 琼脂粉 15 g. 把这些成分加入到990 ml的蒸馏水中，加热使其沸腾。高压灭菌121°C 15分钟，使用之前冷却到45°C，用25% 灭菌的苹果酸溶液调节pH 达到3.7 B）25%的苹果酸,必须经过无菌过滤并且在使用之前加到 K氏培养基中. 2、检测步骤 样品准备 用一个15 ml的广口吸管,以无菌操作移取10 ml样品并且将其加到20 x 150 mm的无菌试管中.另外再取15 ml 样品加入到另一个试管中(温度控制用),给此试管中插入一个温度计. 将两个试管都放入到80°C的水浴中.(水浴锅中的水面应高于试管中的样品).当温度控制用的试管中的温度计达到80°C时,开始计时10分钟. 10分钟后,迅速将试管放入冰浴. 将10 ml经过热处理的样品加到50 ml的灭菌水中. 4． 用真空泵将此60 ml全部通过0.45 μm的滤膜.用10-20 ml的灭菌蒸馏水冲洗这个瓶子和过滤器.确信这张膜被真空抽干.将这张滤膜放到K氏培养基上.为了防止气泡,小心的使滤膜滚贴到K氏培养基上,并且用无菌的镊子轻敲滤膜,使滤膜的边缘紧贴在培养基上. 用密封的容器(塑料袋)将此培养基在43(C 培养 3-5天. 计数平板上所有的菌落并且报告每10 ml 中检出的耐酸耐热菌的结果. 三、日本嘉吉方法（YSG培养基） 1 仪器和试剂 1.1 恒温水浴锅：70±1℃ 1.2 恒温培养箱：45±1℃。 1.3 灭