糖蛋白结构质谱解析样品前处理.pdfVIP

!# 年$ 月 色 谱 ()*+ !% ,)+ % !#$%’ !# !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 !’ ( !# 糖蛋白结构质谱解析的样品前处理 周* 玮，* 刘晓慧，* 周新文，* 申华莉，* 杨芃原 （复旦大学生物医学研究院，上海 !’! ） 摘要：基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱，以标准糖蛋白辣根过氧化物酶（?@A ）、核糖核酸 酶 （@,0= ）为对象，探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程。通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤 （包括蛋白变性方法（ @,0= 适合化学变性，?@A 适合热变性）、酶的选择及条件（@,0= 适用内蛋白酶 B7=- ; 酶解，?@A 适用胰蛋白酶酶解，酶解时间控制在 )! ( ) 3 ）、提肽液的组成（对于低丰度糖蛋白用 %C 乙腈-%C 三 氟乙酸提取）、基质的组成、点样方法（“三明治”式））进行了优化，形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶 液酶解- 质谱分析和胶上分离酶解- 质谱分析的技术路线，为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法。 关键词：糖蛋白结构；质谱解析；样品前处理；条件优化 中图分类号： D%-* * 文献标识码：* * 文章编号：)--# )’ （!# ）%-!’-%* * 栏目类别：样品预处理方法专栏 !#$% ’()’(*+,,-./ 0*( 1,, !$+2(*#2(-+ 3.%4,-, *0 5%4+*$(*2-. !2(6+26( E?DF G1 ，BHF I10)351 ，E?DF I18J8 ，!?/, ?50*1 ，K,L A867508 （!# $%$ $’# () * %(+ ’,%-./ 0-%’-’# ，1 ,. 2%3’4#%$5 ，06.76.% !#! ，86%. ） 37,2(+2 ： 8)M* ，=1%#* 08: 90=$ %$3): 0=: )8 0 N50:’5#)* 1)8 $’0# （OH. ）08: 0 $1%- )9-9*163$ %0== =#2$’)6’0#3 J0= :M*)#: 9)’ $3 6*72)=7*0$1)8 =1$ 08: 6*7208 =$’52$5’ 080*7- =1= )9 6*72)#’)$18 7 18- =)*5$1)8 :16=$1)8 08: 18- 6* :16=$1)8 J3123 :1: 8)$ 8: $) 8’123 08: *0* $3 6*72)##$1:+ ?)’=’0:1=3 #’)P1:0= （?@A ）08: @,0= J’ 5$1*1=: $) )#$1%14 $3 2)8:1$1)8= )9 =0%#* #’-#’)2==186 + .3 992$= )9 $3 2)8:1$1)8= J’ 18M=$160$: =#0- ’0$*7 08: $3 )#$1%0* 2)8:1$1)8= J’ ：30$ :80$5’0$1)8 )9 @,0= ，23%120* :80$5’0$1)8 )9 ?@A ，@,0= :16=$1)8 J1$3 8:)#’)$180= B7=- ; ，?@A :16=$1)8 J1$3 $’7#=18 ，)! . ) 3 )9 :16=$1)8 ，%C 02$)81$’1*-%C $’19*5)’)02$12 021: )9 $3 P$’02$1)8 =)*5$1)8 ，=08:J123 =#)$- $186 %$3):