洪涝灾害过后出现细菌性腹泻案例分析.pptVIP

题设：洪涝灾害过后居民饮用井水后出现细菌性腹泻等肠道疾病，如何确证水中的致病菌？;水质微生物及指示菌：; 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 有时水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。国标规定饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。 ; 细菌总数和大肠菌群的测定是水中致病性细菌检测的重要组成部分： 因为细菌总数含量高时，表明水体受到污染，水中可能含有大量的对人体有害的致病菌，饮用后会引起各种传染性疾病。大肠菌群本身是无害的，但肠道致病菌如伤寒杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌及沙门氏菌等存在时必定有大肠杆菌存在，该菌在外界中生存的时间与肠道致病菌基本一致或稍长，如果大肠菌群已经死灭，那么同时存在的致病菌的危险亦即消失。;水中致病菌的确证过程：;二、细菌总数检验及总大肠菌群检验： （一）细菌总数检测——平皿计数法 1、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注 入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营 养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 2、待冷却凝固后，反转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为1ml水样中的细菌总数。 3、菌落计数及报告方法 同水源水细菌总数检验。 ;（二）总大肠菌群检验—多管发酵法 1.初发酵试验：在2个各装有已灭菌50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样100ml；在10支装有已灭菌5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样10ml，混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。 2、平板分离及复发酵试验步骤均同水源水总大肠菌群检验——多管发酵法。 3、根据证实有总大肠菌群存在的阳性管（瓶）。 ;三、水中可疑致病菌的检测;选择的培养基;上流程图说明： 1、乳糖发酵试验：初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌。（肠道致病菌多数不发酵乳糖；肠道非致病菌多数发酵乳 糖） 2、氧化酶试验：鉴别肠菌科和弧菌科（肠菌科氧化酶：－；弧菌科氧化酶：+） 3、肠菌科生化初筛 ;（1）在沙门菌、志贺菌、EIEC 三菌属中, 只有沙门氏菌具有 鞭毛能运动, 并具有赖氨酸脱羧能力,结果如下图， 按沙门菌进行系统鉴定。 （2）志贺菌和EIEC菌均具有动力( - ),赖氨酸( - )的特点。 但EIEC 可在醋盐培养基中生长, 志贺菌则不能。结果 如下图，按志贺菌鉴定程序进行。;（3）KCN 培养试验, 有助于肠杆菌科菌属鉴别。除变形杆菌、 枸橼酸杆菌能生长外, EIEC 由于生化反应的不典型性, 有资料报道也能生长。而志贺菌属则不能生长, 沙门氏菌属中仅亚利桑那菌可生长( 占0. 6%) , 兼之EIEC 又具有志贺菌属的两个基本特点, 故KCN( + )，动力( - )，赖氨酸( - ) 、尿素( - ) 时, 可EIEC 诊断血清及生化系统进行鉴定。 （4）尿素酶试验: 沙门菌、志贺菌、EIEC 均不能利用尿素。而肠杆菌科中的枸橼酸杆菌、变形杆菌等具有将尿素分解成胺的能力, 故初筛生化结果为赖氨酸(±) 、动力( + )、KCN( + ) 、尿素酶( + ) 时, 则非三菌属范围。;（5）氰化钾（KCN）培养试验： 将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾（KCN）培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36±1℃培养1~2d,观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2d细菌不生长为阴性（抑制）。（注：KCN生长试验培养基在肠杆菌科细菌鉴定中具有重要的意义，多数肠道致病菌在KCN生长试验培养基上不生长，根据这一显著特征，结合其他典型生化反应，可以准确快速地得出鉴定结果。） ; 4、TCBS培养基，用于霍乱弧菌，副溶血性弧菌的分离培养，因为副溶血性弧菌在培养基上形成的菌落为蓝绿色菌落，而霍乱弧菌则为黄褐色菌落。; 小组成员：王玲、陈玲、孙松松、杨江、王海