微生物前言专题讲座.ppt

Replacements of Histidine 226 of NhaA-Na+/H+ Antiporter of Escherichia coli 姓名：邵丽 学号：1509122 导师：姜巨全 教授 1.初级钠离子泵（primary sodium pump） 参与细菌体内钠离子输出的初级钠泵系统及其转运钠离子途径主要包括：（1）脱羧酶在脱酸过程中偶联Na+的输出；（2）甲基四氢叶酸甲烷喋呤辅酶 M 甲基转移酶在脱甲基过程中进行Na+的输出；（3）ATP合成或水解过程中进行Na+的输出转运；（4）NADH在泛醌的还原过程中与Na+的输出相偶联。（图 1-1） Fig. 1 Bacterial Na+ efflux proteins1.钠/氢逆向转运蛋白 2.脱羧酶 3.NADH泛醌氧化还原酶 4.甲基四氢叶酸甲烷喋呤辅酶 M 甲基转移酶 5. V-ATP 酶 6. F-ATP 酶 7.鞭毛运动 8.溶解物的摄取 1.2次级钠离子泵 次级钠离子泵(secondary sodium antiporter)又称为钠（锂）/氢逆向转运蛋白，它是一类在细菌中普遍存在的，以跨膜的质子电化学梯度为驱动力的，催化细胞内的碱性金属阳离子，如 Na+、K+、Li+输出的次级转运蛋白，该过程与细胞外质子（H+）的输入相偶联。 常见突变菌株简介 目前，在大肠杆菌（Escherichia coli）中相继发现了nhaA、 nhaB、chaA和 mdfA 4个不同的钠/氢逆向转运蛋白基因。其中Ec-NhaA和Ec-NhaB是专一性的钠（锂）/氢逆向转运蛋白，而Ec-ChaA除了具有钠/氢逆向转运蛋白的活性，还具有钙/氢逆向转运蛋白和钾/氢逆向转运蛋白的活性。缺失Ec-NhaA和Ec-NhaB的大肠杆菌突变株（E. coli）EP432(nhaA-, nhaB-)仅能在200 mM NaCl上微弱生长，而缺失Ec-NhaA、Ec-NhaB和Ec-ChaA的大肠杆菌突变株（E. coli）KNabc(nhaA-, nhaB-，chaA-)在200 mM NaCl或5 mM LiCl存在或碱性pH条件下均无法生长。因此，新型的钠（锂）/氢逆向转运蛋白基因一般都是通过与大肠杆菌（E. coli）突变株EP432或KNabc的功能互补被克隆和功能鉴定的。 Introduction * * * * Materials and Methods * EXPRERIMENTAL PROCEDURES * * EXPRERIMENTAL PROCEDURES * EXPRERIMENTAL PROCEDURES * EXPRERIMENTAL PROCEDURES Na+/H+逆向转运蛋白活性的测定 为了测定Na+/H+逆向转运蛋白活性，我们通过制备E. coli 实验组和对照组的反转膜。在向加有反转膜和吖啶橙的反应缓冲液中加入乳酸钾后，溶液在波长为530 nm处的吸光值稳定猝灭，然后分别向两种缓冲液中加入2 M NaCl溶液后，监测E. coli 两种反转膜体系出现吖啶橙荧光值的恢复程度。结果表明，实验组体系中出现了荧光值的恢复，而对照组反应体系中加入等量的NaCl时并未出现荧光值的恢复现象。由此我们可以初步鉴定实验组具有Na+/H+逆向转运蛋白活性 * EXPRERIMENTAL PROCEDURES Results and Discussion Results and Discussion Results and Discussion Results and Discussion Results and Discussion Results and Discussion QUESTIONS * 敬请批评指正！ Paenibacillus polymyxa 多粘类芽孢杆菌（属） Paenibacillus polymyxa 多粘类芽孢杆菌（属）