实验八细胞内溶酶体和线粒体荧光标记课件.pptVIP

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2017-08-20 发布于河南
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实验八细胞内溶酶体和线粒体荧光标记课件.ppt

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实验八细胞内溶酶体和线粒体荧光标记课件

细胞内溶酶体和线粒体的荧光活体染色;实验原理;实验原理;1.实验目的 ;Lyso-Tracker Red工作液的配制：;2. 溶酶体的荧光标记： a. 去除细胞培养液，加入步骤1配制好的并28℃预温育的Lyso-Tracker Red染色工作液，与细胞28℃共孵育30分钟。 b. 去除Lyso-Tracker Red染色工作液，加入500微升预温的新鲜的细胞培养液或PBS漂洗。 c. 取出盖玻片，在载玻片上滴一滴PBS，将盖玻片反扣在载玻片上，荧光观察 d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。;使用说明：;2. Mito-Tracker Green工作液的配制： a. 取少量1mM Mito-Tracker Green储存液按照1:5000-1:50000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的 HBSS)中，使最终浓度为20-200nM??例如取1μl Mito-Tracker Green加入到50ml或5ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Mito-Tracker Green工作液。HBSS with Ca2+ Mg2+ (C0219) 可以向碧云天订购。;;1 打开可将光和激发光光源（预热10分钟） 2遮光板遮住激发光 3 选择“1”，在可见光下，聚焦，观察清晰图像，再调到高倍镜下，微调至清晰 4 关掉可见光光源，打开遮光板，让激发光透过 5 选择“G”观察红色荧光 6 选择“B”观察绿色荧光