饲养层密度对兔类犈犁细胞分离培养的影响-畜牧兽医学报.PDF

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１３４４７ １０５１１０５６ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 ： ／ ｄｏｉ１０．１１８４３ ．ｉｓｓｎ．０３６６６９６４．２０１３．０７．００９ ｊ 饲养层密度对兔类 细胞分离培养的影响 犈犛 李小佳，张君涛，徐秋勤，王 鸽，曹书郡，王新庄，张志平 　 （河南农业大学牧医工程学院，郑州 ４５０００２） 摘 要：探讨饲养层细胞接种密度对兔类 ＥＳ细胞分离培养影响，筛选适合兔类 ＥＳ细胞分离培养最适饲养层密 　 度。将兔囊胚分别接种到密度为 ３、 ３ 和 ３个 · －２的小鼠胚胎成纤维细胞（ １０×１０ ２０×１０ ４０×１０ ｃｍ Ｍｏｕｓｅｅｍｂｒｏｎｉｃ ｙ ， ）饲养层上，观察兔类 细胞贴壁和克隆生长情况，并对所得兔类 细胞进行碱性磷酸酶和 ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌＭＥＦ ＥＳ ＥＳ 检测。结果表明，接种于密度为 ３个 · －２饲养层上的囊胚贴壁率（ ）、内细胞团（ Ｏｃｔ４ ２０×１０ ｃｍ ８２．５％ Ｉｎｎｅｒｃｅｌｌ ， ）形成率（ ）高于接种于密度为 ３个 · －２的饲养层上囊胚贴壁率（ ）、内细胞团（ ｍａｓｓＩＣＭ ６７．５％ ４０×１０ ｃｍ ８０．０％ Ｉｎｎｅｒ ， ）形成率（ ），差异不显著（ ）；显著高于（ ）接种于密度为 ３个 · －２饲养层 ｃｅｌｌｍａｓｓＩＣＭ ６５．７％ 犘 ０．０５ 犘 ０．０５ １０×１０ ｃｍ ＞ ＜ 上的囊胚贴壁率（ ）、 形成率（ ）。密度为 ３个 · －２饲养层上的兔类 细胞 、 代细胞 ５５．６％ ＩＣＭ ４４．４％ ２０×１０ ｃｍ ＥＳ Ｆ１Ｆ２ 克隆率均显著高于其他两组（ ），最高已传至 代；获得的兔类 细胞经碱性磷酸酶染色及表面抗原 犘 ０．０５ ２０ ＥＳ Ｏｃｔ ＜ 表达检测均呈阳性。密度为 ３个 · －２的 饲养层可更好支持兔类 细胞体外培养。 ４ ２０×１０ ｃｍ ＭＥＦ ＥＳ 关键词：成纤维细胞；密度；兔类 细胞 ＥＳ 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８２９．１Ｑ８１３ Ａ ０３６６６９６４２０１３０７１０５１０６ 　　　　 　　　　 犈犳犳犲犮狋狅犳犇犲狀狊犻狋犻犲狊狅犳犉