HPLC逆相层析法原理.ppt

* * 　　逆相层析管柱C18,C8,Ph,C4,C2,C1的再生 调配(不含酸、盐类)如原分析的有机相与H2O比例的 MeOH / H2O, AeCN / H2O… 为洗液至少流洗150ml 若欲清洗“金属离子” 流洗0.005M EDTA Disodium in H2O约100ml，再流洗 　　MeOH / H2O约60ml 流洗 100% MeOH约100ml 流洗 AeCN/THF ( 或Acetone ) = 50/50约100ml 流洗 100% MeOH约100ml 测试, Column Performance Test 清洗Column的流速，为分析时流速的50%或更小，即分析时流速为1.0ml/min，清洗时流速为0.5ml/min或更小为宜 层析管柱逐渐增高压力说明 *层析管柱(保护管柱)，入(出)口端各有2um滤片、移动相或注入Sample，夹杂有杂粒子，逐渐杜塞于该“滤片”使得显现增高的压力。 补救之道: (1)更换滤片(2)层析管柱逆洗(3)加强Sample，移动相的过滤、离心 *层析管柱内材料粒子有一定的孔径 (Pore Size:100?, 120?, 300?) 及粒子之间的孔隙 ( void volume )，假使分析物群，有某些较高分子量，或高非极性物，无法被该移动相溶洗出者，将逐渐沈积或被吸附住，而显现逐渐增高的压力。 补救之道: 以高溶洗移动相:Acetone / H2O = 25 / 75, THF / H2O = 50 / 50, IPA / AeCN = 25 / 75将Column逆洗。 Column保存液 盐类的伤害:　Phosphate Acetate Carbonate 　　　　　　　　H3PO4 TFA HAc　　　　　　　 当含酸、盐类移动相流通Column时，千万勿含酸、盐类移动相静置Column中，此种静置最具伤害力。 分析毕，Column经由清洗、再生过后，必须保存于“没有酸、盐类”的70% AeCN in H2O移动相 * * * * * * * * * * * * * * If metal was contained in silica gel as an impurity material, the packing material can make bad peak form. Please careful to select the columns. シリカゲル中の不纯物として金属が含有していると、ピーク形状が悪化する试料もあるので、カラム选びには十分気をつけてください。 * Inertsil series is high purity It is a silica gel of much less contained metal volume. Inertsil シリーズは高纯度です。 含有金属量も非常に少ないシリカゲルカラムです。 * * * * * * * * * * * * * * Reverse Phase ( RP ) – HPLC 逆相层析法 液相层析法-分离模式 HPLC分析物、移动相、层析管柱之关联 分析物 1.结构式 2.疏水性 3.极 性 4.溶解性 5.吸旋光性 移动相- 对分析物质的溶出性 层析管柱- 1.有机相 与分析物的亲和作用 2.有机相/水.酸.盐类 3.水.酸.盐类 HPLC层析管柱的基础材料-硅胶 硅胶 (Silica Gel)俱有活性硅醇基Si-OH (Silanol Group) *全孔性 (Totally Porous) *粒型 (Particl