实验二芦荟粗多糖的提取课件.ppt

实验二 芦荟粗多糖的提取 实验性质：验证性实验 学时数：3学时 生物制药实验课程 【实验目的与要求】 掌握水提醇沉法提取多糖的原理和方法 掌握旋转蒸发器的使用 掌握组织匀浆机的使用 【实验原理】 水提醇沉法（水醇法）系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。 一般操作过程是：将中药水提液浓缩至1︰2，药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。 操作时应注意以下问题： ①适当浓缩，以减少乙醇用量。控制浓缩程度，过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。 ④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。 ⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。 ⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。 【实验材料、试剂与仪器】 试剂：无水乙醇。 烧杯、玻璃棒、小刀、纱布、量筒、电子天平、高速冷冻离心机、旋转蒸发仪、真空泵、水浴锅、组织匀浆机。 【实验方法与步骤】 ①取芦荟鲜叶50 g，洗净，去掉叶尖和叶底，在自来水（蒸馏水）中浸泡0.5 h，以除去由表皮渗出的黄色液汁。然后切去表皮，将内层凝胶置于烧杯中，加入3倍量自来水（蒸馏水），置于55 ℃恒温水浴锅中加热浸提4 h。 ②浸提液减压浓缩，用6 mol/L的盐酸调pH值3.2左右，向经过调酸处理的芦荟凝胶浓缩汁中缓慢加入6倍量的95%乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，室温下静置2 h，离心分离(2500 r/min，7 min)得多糖沉淀。依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤，然后真空干燥，最终得到的沉淀即为芦荟多糖粗品。 或：减压浓缩至原来的1/3,向浓缩汁中缓慢加入6倍体积冷的无水乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，室温下静置2 h，得粗多糖沉淀。 【注意事项】 加入乙醇沉淀多糖时要边加边搅拌，时间要长一些; 注意仪器的规范使用； 实验结果与记录: 记录实验条件、过程和实验现象。 【思考题】 为什么要在醇沉之前调pH值？ 水提醇沉法原理？ 如何定量多糖的含量？ 如何判断该化合物为多糖？