快速鉴定格尔德霉素产生菌——吸水链霉菌17997中的洋橄.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, July 25; 27(7): 1109−1114 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 快速鉴定格尔德霉素产生菌——吸水链霉菌17997 中的 洋橄榄叶素 1 1 1,2 1 1 1 李书芬 ，武临专 ，陈菲菲 ，王红远 ，孙桂芝 ，王以光 1 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京 100050 2 中国医药集团四川抗菌素工业研究所，成都 610052 摘 要: 对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌 17997 的发酵液乙酸乙酯提取物进行了硅胶板TLC 初步分离和NaOH 溶液喷 涂显色，对显红色、具有抗革兰阳性菌活性的条带进行了 HPLC 分析，提示抗革兰阳性菌活性化合物可能为大环二内 酯类抗生素洋橄榄叶素；以dTDP- 葡萄糖-4,6-脱水酶 (Tgd) 基因保守区设计PCR 引物，扩增了吸水链霉菌17997 基因 组DNA 中的tgd 并进行了序列分析，表明吸水链霉菌 17997 含有洋橄榄叶素生物合成基因簇中的 tgd 基因；对NaOH 溶液喷涂显红色的化合物进行LC-(+)-ESI-MS 分析，证实其为洋橄榄叶素。因此，吸水链霉菌 17997 产生洋橄榄叶素； 同时，建立了一种快速鉴定洋橄榄叶素及其产生菌的方法，主要包括TLC 硅胶板分离、NaOH 溶液显色、HPLC 和LC-MS 分析，以及tgd 的PCR 检测与序列分析。 关键词: 吸水链霉菌17997，洋橄榄叶素，液相色谱-质谱联用 (LC-MS) ，dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶，格尔德霉素 Rapid identification of elaiophylin from Streptomyces hygroscopicus 17997, a geldanamycin producer 1 1 1,2 1 1 1 Shufen Li , Linzhuan Wu , Feifei Chen , Hongyuan Wang , Guizhi Sun , and Yiguang Wang 1 Key Laboratory of Biotechnology of Antibiotics of Ministry of Health , Institute of Medicinal Biotechnology , Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beijing 100050, China 2 Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Sinopharm, Chengdu 610052, China Abstract: To identify the anti-bacterial compound(s) from Streptomyces hygroscopicus 17997, a geldanamycin producer, silica gel thin layer chromatography (TLC) TLC was used to separate the secondary metabolites of S