尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤细胞株RPIMI8226增殖及其机制.PDFVIP

尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤细胞株 RPIMI 8226 增殖及其机制研究  叶宝东，邵科钉，陈丹，张翔，张宇，周郁鸿(浙江中医药大学附属第一医院，杭州 310006) 摘要：目的 探讨尿多酸肽(CDA-2)抑制多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226 增殖作用及其机制。方法 采用四甲基偶氮唑 (MTT) 比色法检测CDA-2 对RPMI8226 抑制作用并筛选研究浓度；通过Hoechst33258 、Annexin-V/PI 、细胞周期分析、 DNA 琼脂糖凝胶电泳等方法检测CDA-2 诱导RPMI8226 凋亡作用；使用Western Blot 法检测caspase-8、caspase-3 及其 激活物的表达改变；半定量RT-PCR 法检测TNF、FADD 、TRAF3 mRNA 表达。结果 CDA-2 能够抑制RPMI8226 细胞 株增殖，并呈浓度依赖性，IC 1 50 为1.64 mg·mL ；经CDA-2 作用后，Hoechst33258 荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡 小体，Annexin-V/PI 分析示早期凋亡细胞比例呈时间依赖增加，细胞周期分析提示呈浓度依赖上调凋亡峰及下调G1 期比 例，DNA 凝胶电泳可见断裂成 180~200 bp 及其倍数的片断梯形条带，故CDA-2 可诱导RPMI8226 细胞株凋亡；Western Blot 检测发现随药物作用时间延长caspase-8、caspase-3 表达明显下降，而active-caspase8、active-caspase3 表达上升；半 定量RT-PCR 证实凋亡相关基因TNF、FADD 、TRAF3 mRNA 表达上调。结论 CDA-2 可抑制RPMI8226 增殖，且可通 过死亡受体途径诱导细胞凋亡。 关键词：尿多酸肽；RPMI8226 ；增殖抑制 中图分类号：R965.2 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2013)11-1161-05 Uroacitides(CDA-2) Inhibited the Proliferation of Multiple Myeloma Cell Line RPMI 8226 YE Baodong, SHAO Keding, CHEN Dan, ZHANG Xiang, ZHANG Yu, ZHOU Yuhong(The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medicine University, Hangzhou 310006, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To explore the effects of uroacitides(CDA-2) on the proliferation of RPMI 8226 cells and its mechanisms. METHODS The proliferative inhibition of CDA-2 on RPMI 8226 cells was detected by MTT and the drug concentrations for further researches were screened out. The apoptosis of RPMI8226 cells after treating with CDA-2 was analyzed by Hoechst33258 staining, Annexin-V/PI staining, PI staining, and DNA gel electrophoresis. Changes in the expression of caspase-8, caspase-3 and their active forms were tested by Western Bl