探寻差异表达基因的方法进展.PDF

维普资讯 2∞ 年 2 ^lI自IdACd ．Try,G删 睡 ，2000；21(1)：22—27 8 h_邗 iNd Tramp]antPmc．2001；33‘1_2)：1948—1949 Mi~kaT．Bi0c●哪 Bi叩llB墨c棚mm．2(]01；281(1)：1—5 9 Znb,av~hlN ．Sdmcc，2o00；287(5456)：1258—1262 11血 NDda1．H印td。 ，2t~o；32(I)：11—16 10 F,nosawmseta1．Cell 锄日 III，199]：65‘)：537—540 eI·匝ⅡEd ．sci∞∞，l999；2H( 17)：1168—1170 11 B啉m Sda1．_rT帅 P魄 ，2001；弱{1_2)；1945一toA．7 x：b _日Nd矗I．H哪lce¨，2000；i3(4)：229—235 12 Wern~ A d e1．^rmNY ^ Sc1．1999~g／5：364—368 13 h晰 诅Yd ．Aalf 舯 ．000； (12)：932—938 探寻差异表达基因的方法进展 浙江太学医学院附属第一医院 (310003) 部敏综述 蔡卫民 陈智审校 摘 要：随着人类基因组计划的进展 ，对于疾病与基因差异表达的关系研究越来越引起研究者的重撬，为此人 们毫立了一系刊寻找差异表达基因的方法，本文就这些方法从其原理、在分子生物学中的应用、忧缺点及其改进方 法等加以简要概述。 关量词：基因；差异表达 高等真核生物约含 10万个不同基因，但在生物 或 HasⅢ限制性 内切酶切割成大小适当的平末端 体的发育过程中只有 15％的基因得以表达，而这大 eDNA片段，将试验方 cDNA分为两组，分别在 eDNA 约 1503(0个基因的表达是按时闽和空间顺序有序地 的5端连接上两个不同的寡聚核苷酸接头 (接头 I 进行着，这种表达方式即为基因的差异表达。基因 和接头2)，分别向两个试验方样品中加人过量的驱 的选择表达，决定着整个生命过程。要弄清生命现 赶方 eDNA进行第一轮杂交。反应完毕后，将产生4 象的分子调节机制，就要比较不同细胞或不同基因 种杂交分子，即a．单链 TestercDNA，b．自身退火的 型在基因表达上的差异，对选择性表达的基因进行 双链T妇 cDNA，c．异源双链，d．DriveeDNA。第一 分离、克隆并进一步的研究。为此，一系列寻找差异 次杂交后，合 并两份杂交样本，再加入新 的变性 表达基因的方法被建立起来：如示差筛选，差减杂 DriveeDNA进行第二次杂交。这次杂交产生新的双 交、mRNA差异显示 (mPd~Adifferentialdi~phr，DDRT- 链分子e，e分子的两个5端含有不同的接头，填平 PeR)法、基因表达的连续分析(~-hlanalysisofgene 粘性末端后，利用套式 PCR原理进行扩增。a、d型 expression，SAGE)、代表性差异分析 (mp~ mdonal 分子不扩增b型分子是由于两端有长序列的反向重 di~emace∞ B，RDA)和抑制性差减杂交 (suppr~- 复，可互补形成 “锅一柄”结构而无法扩增。c型分子 signsubuac6vehv d．比日ti∞，SSH)、交互消减 RNA差 只有一端有一个引物，只能进行线形扩增。而 e型 别显示技术(mcipm~ sabtracfi~differentia]RNAdis— 分子两端不同的接头确保了和引物的配对，保证此 play，Rs叩)、基因确认整合步骤法 (integratedproce- 差异序列能在 PCR中得到大量扩增。接头单链末 duIeforgeneidentification，母GI)及 目前最为有效的基 端的互补序列选择性地抑制了非特异性片段的扩 因芯片技术等。本文就近