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多重PCR检测社区获得性肺炎患者中病原体[摘要] 目的 评价多重PCR在快速诊断社区获得性肺炎病原体中的作用。方法 提取痰液标本中的DNA，扩增病原体DNA后电泳并观察其结果，同时给予普通PCR或分离培养作为对照。结果 成功检测出32例感染者，与普通PCR符合率达100%，敏感性高于分离培养。结论 多重PCR能高通量、快速诊断病原体，值得临床进一步推广。 [关键词] 多重PCR；社区获得性肺炎；病原体 [中图分类号] R563.1 [文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2009）12-57-02 Detection of Pathogens in Patients with Community-acquired Pneumonia by Multiplex PCR HE XinpingLIUJingfangTAN Huimin Department of the Elderly Officials，Changsha Central Hospital， Changsha 410007 [Abstract] Objective To observe the rapid diagnosis value of multiplex PCR in patients with community-acquired pneumonia. Methods DNA was extracted and amplified from sputum. Common PCR or separation cullture was used as control. Results Pathogens were amplified from 32 patients，compared with common PCR，the coincidence was 100%，but the sensitivity was higher than separation cullture. Conclusion Multiplex PCR is a high-flux，repid method for clinical diagnosis of pathogens. [Key Words] Multiplex PCR； Community-acquired pneumonia； Pathogen 社区获得性肺炎（Community-acquired pneumonia，CAP）是指在医院外罹患的感染性肺实质（含肺泡壁，即广义上的肺间质）炎症，包括具有明确潜伏期的病原体感染而在入院后潜伏期内发病的肺炎[1]。传统的病原学诊断包括分离培养以及PCR。然而对于部分难以培养的病原体如肺炎支原体，常规的方法难以达到快速诊断的目的，普通PCR也存在监测通量低等问题[2]。本文采用多重PCR（multiplex PCR）就2006～2008年来我院住院的CAP患者进行了相应比较研究，旨在对多重PCR的临床应用作出初步评价。 1材料与方法 1.1材料 Tag酶，dNTPs，PCR缓冲液，引物合成等均来自上海生物工程有限公司；DNA抽提试剂盒购自QiaGen公司；PCR仪为德国Eppendorf公司产品；普通肉汤葡萄糖培养基、血琼脂培养基购自上海美季生物技术有限公司。其余所有生化试剂均为分析纯。 1.2病例选择及标本来源 本研究所采用的76例痰标本均来自本院住院的CAP患者，所有患者肺部感染的符合中华医学会2006年制定的《社区获得性肺炎诊断和治疗指南》标准[3]，其中男性44例，女性32例，年龄41～74岁，平均52.5岁。痰标本分别来自上述76例患者，均为清晨清洁口腔后的一口来自肺深部的痰，所有患者取材前2w内均未接受抗菌药物治疗。 1.3方法 1）检测肺炎球菌、肺炎衣原体、肺炎支原体和流感嗜血杆菌的多重PCR引物信息见表1[4]。20μl反应体系中加入标本DNA 2μL，扩增方案为：94℃变性10min，然后94℃ 30s、58℃ 30s、72℃ 1min，共40循环。最后一循环，72℃延伸7min。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析。所有病原体同时通过普通PCR做对照。判断标准：扩增产物条带电泳位置与Marker电泳位置相同者为该菌阳性。2）细菌培养：痰标本经常规处理后接种于普通培养基和琼脂培养基上，37℃孵育24～48h行革兰染色及有关生化反应鉴定。 2结果 2.1 多重PCR与普通PCR检测结果 多重PCR与普通PCR检测结果完全一致。痰标本同时进行多重PCR和普通PCR检测，两者均检测出肺炎球菌14例，肺炎衣原体2例，肺炎支原体5例，流感嗜血杆菌11例，其中有25份