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HPLC测定心宁片中丹参素含量[摘要]目的：改进心宁片中丹参素的含量测定方法。方法：以50%甲醇为提取溶剂，超声处理30 min，采用甲醇－1%冰醋酸（6:94）为流动相，进行测定。结果：方法简便易行、重现性好。结论：本文所采用的方法可以作为心宁片的含量测定方法。 [关键词]丹参素；心宁片；高效液相；含量测定 [中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）07（a）-147-02 心宁片，是由丹参、槐花、川芎、三七等7味中药组成的复方制剂，具有理气止痛，活血化瘀之功效。临床上用于冠心病，心绞痛，气滞血瘀所致胸痹，症见胸闷、胸痛、心悸、气短[1]。该制剂原收载于部颁标准[2]，现收载于2005版《中国药典》[3]一部。药典中规定了心宁片中丹参素的含量测定方法，其中供试品溶液的制备方法比较繁琐，误差较大。本文对丹参素的含量测定中供试品溶液的制备方法和色谱条件进行改进，经方法学考察结果良好。 1 材料与方法 1.1 仪器 岛津-10ATvP，浙江大学N2000色谱工作站，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，Diamonsil(钻石)-C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）(迪马公司提供)。 1.2 试剂 丹参素对照品，中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。 1.3 色谱条件 色谱柱：C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇－1%冰醋酸（6:94）；柱温：30℃；检测波长：280 nm；流速：1.0 ml/min。样品中丹参素峰与其他峰分离度大于1.5；理论板数按丹参素峰计算应不低于1 500。 1.4 实验条件 1.4.1 提取溶剂的选择以不同浓度的乙醇、甲醇为溶剂，采用超声提取方法，测定同批样品，结果显示采用50%甲醇为溶剂，提取较完全。 1.4.2 提取方法及时间的选择以50%甲醇为溶剂，分别超声处理15、30、60、120 min测定同批样品，结果采用超声处理30 min为宜，提取较完全。 2 结果 2.1 阴性干扰试验 按处方量称取除丹参外的药材，相同制备工艺制成阴性样品，再以供试品溶液的制备方法，制备丹参阴性对照溶液。分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定。结果表明，阴性液无干扰。 2.2 线性关系的考察 精密量取丹参素钠对照品溶液（12.4 mg/50 ml）0.5、1.0、1.5、2.0、3.0和4.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值。其进样量与峰面积关系见表1。 以丹参素钠对照品的进样量X为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=770 653X-8093，r=0.999 95。结果表明，丹参素钠在0.124～0.992 μg/ml范围内线性关系良好。 2.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于配制后0、2、4、8、12 h依法测定，计算峰面积积分值，结果见表2。平均积分值为395 253，RSD=0.47%。表明供试品溶液在12 h内基本稳定。 2.4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，进样10 μl，重复进样5次，计算峰面积积分值，结果见表3。平均积分值为392 393，RSD=0.44%。表明精密度好。 2.5 重复性试验 取同一批样品5份进行测定，结果见表4，平均含量为1.37 mg/片，RSD=0.93%，表明重现性良好。 2.6 回收率试验 采用加样回收法。将已知含量的同一批号的样品(4.47 mg/g)研细，取0.25 g，精密称定，精密加入50%甲醇45 ml，再精密加入丹参素钠对照品溶液（13.4 mg/50 ml）5 ml，按供试品溶液的制备方法制备，上述色谱条件测定，结果见表5。 2.7 样品测定 对照品溶液的制备：精密称取丹参素对照品13.2 mg，置50 mL量瓶中，加50%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含丹参素52.8 μg)。 供试品溶液的制备：取心宁片20片，除去包衣，精密称量，计算平均片重，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1