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NHS 活化琼脂糖凝胶 FF new 一、 简介 NHS 活化琼脂糖凝胶 FF ，是用 NHS 和琼脂糖凝胶上的羧基形成活化酯，在很温和的 条件下，pH7-8 可以偶联高浓度带氨基的各种配基制备成亲和填料或者固定各种物质。 NHS 活化琼脂糖凝胶 FF 由于应用新的合成方法，所以配基密度高，流速快，非特异吸 附少，是合成亲和填料的不错选择。 二、 亲和填料特征： 特点 载量大，使用方便，保存时间长。 基质 交联琼脂糖凝胶 配基 NHS 配基密度 20-40 μmol /ml 可偶联15mg/ml 蛋白 平价粒径 90 μm 最大流速 300cm/h pH 范围 3-10，在位清洗时pH 范围可到 2-11 偶联 pH 6-10 保存温度 -20℃ 保存状态 100%异丙醇 三、 适用范围 纯化或固定各种带氨基物质。 四、 应用实例 实验名称：NHS 活化琼脂糖凝胶偶联抗体。 实验步骤： 1、取 100mg IgG 加 pH8.3 0.2M 碳酸氢钠溶液 10ml 溶解，留 0.1ml 以便测定偶联效率。 2 、取 5ml NHS 活化琼脂糖凝胶用 1mM 盐酸 20 分三次抽滤清洗后加入偶联溶液中，4 度，震荡反应 4 小时。 3、洗干净填料得到偶联抗体的填料，然后用 10mM 乙醇胺，pH8.0 ，0.2M 碳酸钠缓冲 液 20ml,室温震荡 4 小时或者过夜封闭未偶联的基团.洗干净即可。 如果是偶联小分子的物质可以室温反应，pH 和温度可以适当提高，这样会得到更高的偶联 效果。 五、 应用的注意事项： 1、 活化的填料现取现用，免时间过长造成活性降低。-20 度密封保存，这样可以存放 2 年。 如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上 4 ℃振摇偶联 1-12 小时，以维持配基的活性。 １ 北京韦氏博慧色谱科技有限公司 北京经济技术开发区同济中路甲 7 号 B 座 931 室 邮政编码：100176 TEL：010 FAX ：010 如果配基的稳定性不了解，可以用配基配相应浓度的溶液 0.5-1ml，分别选择不同 pH 及温度然后不加填料模拟偶联条件，观察溶液是否有沉淀，有沉淀偶联效果就不好，可 以稍微降低pH 或温度，同时可以加 5%左右的甘油或 PEG 保护蛋白,避免沉淀，总之对 于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。通常 pH8.3 左右偶 联就可以取得很好的效果. 2 、 此填料只能用于带氨基的物质，因为反应效率高而且温和，特别适合偶联大分子物质如 抗体等。 3、 偶联配基后尽快清洗填料，避免在高 pH 条件中，配基失活。 4 、 更稳定的配基可以直接溶解于 0.2M 碳酸氢钠，温度可适当提高如常温，偶联时间则相 应缩短至 1-2 小时。 5、 偶联蛋白的最适 pH 为可以在 7.5-8.0 左右，在室温或 4 ℃均可，温度提高能增加配基的 偶联效率，根据蛋白的稳定选择合适的 pH 和温度，偶联蛋白溶液的浓度为 5-15mg/ml 。 填料体积和配基溶